1、GSH等巰基化合物的測(cè)定方法目前文獻(xiàn)較多。測(cè)定方法是利用衍生化試劑的光度法和分離為基礎(chǔ)的分析方法，但目前不同的方法之間還有樣品前處理過程的不同，其含量測(cè)定結(jié)果有較大的差異。本文利用O PA和DTN B衍生化試劑，用活性面包酵母作為活細(xì)胞樣本，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的前處理方法，分別利用光譜法、色譜法測(cè)定了酵母中的GS H和總巰基(-SH)含量，并對(duì)不同前處理方法和分析方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比對(duì)，確立了準(zhǔn)確測(cè)定生物細(xì)胞內(nèi)的GSH等巰基化

2、合物的分析方法。谷胱甘肽(GSH)具有重金屬解毒作用，而目前大多認(rèn)為是 GSH中的官能團(tuán)，像巰基、羧基、氨基等對(duì)重金屬的配位作用所致，但細(xì)胞內(nèi)的GSH對(duì)外源性的有毒重金屬脅迫的響應(yīng)及解毒機(jī)制尚不十分清楚。本研究用活性酵母為活細(xì)胞樣本，利用已確立的分析方法測(cè)定了不同重金屬脅迫時(shí)細(xì)胞內(nèi) GS H和總巰基的應(yīng)答作用，借此進(jìn)一步探討了外源性重金屬與胞內(nèi)的GSH和巰基化合物的相互作用機(jī)制，為GSH等巰基化合物在重金屬解毒中的化學(xué)機(jī)制的研究提供了基

3、礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究分為五個(gè)部分：第一章緒論。概述了生物細(xì)胞內(nèi)GS H等巰基化合物測(cè)定方法及重金屬解毒機(jī)理研究中目前面臨的若干問題，并提出了本文的選題思想和主要研究?jī)?nèi)容。第二章通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)衍生化試劑DTN B對(duì)GS H、Cys以及含半胱氨酸殘基的蛋白質(zhì)中的巰基并無選擇性，可以通過定量釋放的衍生化產(chǎn)物測(cè)定樣品中總巰基的含量，衍生化試劑OPA與巰基化合物中的GSH具有選擇性作用并生成熒光衍生化產(chǎn)物。采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生

4、化的樣品前處理方法，利用O PA和DTN B為衍生化試劑通過熒光分光光度法和UV-Vis分光光度法分別測(cè)定了活性面包酵母中 GSH和總巰基的含量。酵母中GSH和總巰基的含量分別為12.0213μmol/L-12.0823μmol/g和28.9859-29.2515μmol/L，回收率達(dá)99.47％和100.65%，其檢測(cè)限分別為0.2655μmol/L和0.0745μmol/L。第三章以DTNB為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的

5、同步衍生化的樣品前處理方法，利用高效液相色譜法柱前衍生化法測(cè)定了酵母中GSH和總巰基含量。酵母中GSH和總巰基的含量分別為12.0569μmol/g和29.2823μmol/g,回收率達(dá)99.43%和100.87%，其檢測(cè)限分別為0.2296μmol/L和0.7649μmol/L。第四章采用含GSH和巰基蛋白的活性酵母作為生物細(xì)胞樣本，利用光譜法和色譜法研究不同重金屬脅迫時(shí)巰基化合物的應(yīng)答作用。主要探討了GSH等巰基化合物與Cd、Cu、

6、Cr、Fe、Pb等重金屬與巰基化合物的相互作用，為生物細(xì)胞對(duì)重金屬解毒和積累作用的機(jī)制的探討提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第五章利用鄰苯二甲醛(OPA)和4,4μ-二硫代聯(lián)吡啶（4-DPS）為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁和衍生化為一體的樣品前處理方法，分別用熒光分光光度法和UV-Vis分光光度法測(cè)定了玉米須中GSH、總巰基(-SH)的含量。玉米須中GSH和總巰基的含量分別為0.0773-0.0788μmol/g和1.0751-1.0874μmol/g，