解淀粉芽孢桿菌與其誘變菌株酶系分析和蛋白酶基因克隆表達.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩84頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本論文的主要研究內(nèi)容包含以下幾點:
  通過培養(yǎng)菌株NCU116與誘變菌株NCU116-1,并對其菌落形態(tài)及其在掃描電鏡下的形態(tài)進行對比,發(fā)現(xiàn)菌株誘變前后的菌落形態(tài)和細菌形態(tài)基本變化不大。菌落呈圓形、外表光滑,顏色為淺黃色、邊緣有不規(guī)則波狀突起。用分析型掃描電子顯微鏡下觀察,菌株形態(tài)為桿狀,表面光滑,呈鈍圓形態(tài),較細長,單個或多個首尾相連排列。結果表明,對于某些菌株,物理化學誘變對其分泌胞外酶的基因產(chǎn)生影響較大,使控制胞外酶性狀的

2、DNA發(fā)生了一定程度的突變,而對其菌落和細胞形態(tài)并無引起較大改變。
  通過搖瓶培養(yǎng)的方式對菌株NCU116和NCU116-1進行培養(yǎng),使用國家標準方法、CMC-Na法等對胞外酶進行分析。結果表明菌株胞外酶系包括:蛋白酶、糖化酶、果膠酶、纖維素酶、淀粉酶。并確定了各個胞外酶活力與發(fā)酵時間的關系及其最佳發(fā)酵時間。結果表明:
  菌株NCU116,搖瓶發(fā)酵44h時,菌株所產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶活力最高,分別為4536.5U/mL和4.

3、8U/mL;糖化酶的活力最高值(4070.9U/mL)出現(xiàn)在搖瓶38h時;發(fā)酵42h時,果膠酶和纖維素酶活力最高,分別為875.3U/mL和57.0U/mL。誘變菌株NCU116-1,搖瓶44h時,菌株所產(chǎn)蛋白酶活力最高,為9027.0U/mL;果膠酶在搖瓶42h活力最高(1944.2U/mL),糖化酶,淀粉酶,纖維素酶在搖瓶40小時活力最高(分別是10727.6U/mL,6.3U/mL和29.2U/mL)。
  使用國家標準方法

4、、CMC-Na法等對解淀粉芽孢桿菌NCU116與NCU116-1胞外酶系的酶學性質進行分析。結果表明:
  原始菌株NCU116所產(chǎn)的蛋白酶在50℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為40-45℃、最適作用pH值為7.0,Mn2+對其有激活作用;糖化酶在45℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為40-45℃、最適作用pH值為6.0,Ca2+對其有激活作用;果膠酶在40℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為35-40℃、最適作用pH值為7.0,

5、Ca2+對其有激活作用;纖維素酶在35℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為35-40℃、最適作用pH值為7.0,Ca2+對其酶活有微弱促進作用。
  誘變菌株NCU116-1所產(chǎn)蛋白酶在50℃時活力最高,Mn2+對其有激動作用,最適宜酶解溫度為40-45℃、適宜酶解pH為8.0;糖化酶在35℃時活力最高,Cu2+對其有激動作用,最適宜酶解溫度為35℃左右、適宜酶解pH為8.0;果膠酶在40℃時活力最高,Ca2+對其有激動作用,最適宜

6、酶解溫度為35-40℃、適宜酶解pH為6.0;纖維素酶在50℃時活力最高,Cu2+對其有活力有促進作用,最適宜酶解溫度為40-45℃,適宜酶解pH為7.0。
  以解淀粉芽孢桿菌NCU116作為研究對象,對其蛋白酶基因進行了克隆、表達與純化。通過基因克隆方法,得到了一條長度為1494bp的蛋白酶基因,經(jīng)Blast序列分析可知,該基因與Bacillus amyloliquefaciens中性蛋白酶基因(Sequence ID: K0

7、2497.1)有99%的同源性。蛋白酶目的基因所編碼的蛋白理論分子量(Molecular weight)為52.85kDa,等電點pl=8.25,正電荷氨基酸殘基(Arg+Lys)數(shù)目為53個,負電荷氨基酸殘基(Arg+Lys)數(shù)目為51個。不穩(wěn)定系數(shù)(The instability index)為25.93,表明該蛋白穩(wěn)定性比較好。280nm處消光系數(shù)為59710M-1 cm-1。脂肪系數(shù)為71.33,總平均親水性為-0.658。該蛋

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論