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![解淀粉芽孢桿菌與其誘變菌株酶系分析和蛋白酶基因克隆表達.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/6/23/bb59e5f5-82d9-4608-a20f-9bbede52f812/bb59e5f5-82d9-4608-a20f-9bbede52f8121.gif)
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文檔簡介
1、本論文的主要研究內(nèi)容包含以下幾點:
通過培養(yǎng)菌株NCU116與誘變菌株NCU116-1,并對其菌落形態(tài)及其在掃描電鏡下的形態(tài)進行對比,發(fā)現(xiàn)菌株誘變前后的菌落形態(tài)和細菌形態(tài)基本變化不大。菌落呈圓形、外表光滑,顏色為淺黃色、邊緣有不規(guī)則波狀突起。用分析型掃描電子顯微鏡下觀察,菌株形態(tài)為桿狀,表面光滑,呈鈍圓形態(tài),較細長,單個或多個首尾相連排列。結果表明,對于某些菌株,物理化學誘變對其分泌胞外酶的基因產(chǎn)生影響較大,使控制胞外酶性狀的
2、DNA發(fā)生了一定程度的突變,而對其菌落和細胞形態(tài)并無引起較大改變。
通過搖瓶培養(yǎng)的方式對菌株NCU116和NCU116-1進行培養(yǎng),使用國家標準方法、CMC-Na法等對胞外酶進行分析。結果表明菌株胞外酶系包括:蛋白酶、糖化酶、果膠酶、纖維素酶、淀粉酶。并確定了各個胞外酶活力與發(fā)酵時間的關系及其最佳發(fā)酵時間。結果表明:
菌株NCU116,搖瓶發(fā)酵44h時,菌株所產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶活力最高,分別為4536.5U/mL和4.
3、8U/mL;糖化酶的活力最高值(4070.9U/mL)出現(xiàn)在搖瓶38h時;發(fā)酵42h時,果膠酶和纖維素酶活力最高,分別為875.3U/mL和57.0U/mL。誘變菌株NCU116-1,搖瓶44h時,菌株所產(chǎn)蛋白酶活力最高,為9027.0U/mL;果膠酶在搖瓶42h活力最高(1944.2U/mL),糖化酶,淀粉酶,纖維素酶在搖瓶40小時活力最高(分別是10727.6U/mL,6.3U/mL和29.2U/mL)。
使用國家標準方法
4、、CMC-Na法等對解淀粉芽孢桿菌NCU116與NCU116-1胞外酶系的酶學性質進行分析。結果表明:
原始菌株NCU116所產(chǎn)的蛋白酶在50℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為40-45℃、最適作用pH值為7.0,Mn2+對其有激活作用;糖化酶在45℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為40-45℃、最適作用pH值為6.0,Ca2+對其有激活作用;果膠酶在40℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為35-40℃、最適作用pH值為7.0,
5、Ca2+對其有激活作用;纖維素酶在35℃下的酶活力最高,其最適作用溫度為35-40℃、最適作用pH值為7.0,Ca2+對其酶活有微弱促進作用。
誘變菌株NCU116-1所產(chǎn)蛋白酶在50℃時活力最高,Mn2+對其有激動作用,最適宜酶解溫度為40-45℃、適宜酶解pH為8.0;糖化酶在35℃時活力最高,Cu2+對其有激動作用,最適宜酶解溫度為35℃左右、適宜酶解pH為8.0;果膠酶在40℃時活力最高,Ca2+對其有激動作用,最適宜
6、酶解溫度為35-40℃、適宜酶解pH為6.0;纖維素酶在50℃時活力最高,Cu2+對其有活力有促進作用,最適宜酶解溫度為40-45℃,適宜酶解pH為7.0。
以解淀粉芽孢桿菌NCU116作為研究對象,對其蛋白酶基因進行了克隆、表達與純化。通過基因克隆方法,得到了一條長度為1494bp的蛋白酶基因,經(jīng)Blast序列分析可知,該基因與Bacillus amyloliquefaciens中性蛋白酶基因(Sequence ID: K0
7、2497.1)有99%的同源性。蛋白酶目的基因所編碼的蛋白理論分子量(Molecular weight)為52.85kDa,等電點pl=8.25,正電荷氨基酸殘基(Arg+Lys)數(shù)目為53個,負電荷氨基酸殘基(Arg+Lys)數(shù)目為51個。不穩(wěn)定系數(shù)(The instability index)為25.93,表明該蛋白穩(wěn)定性比較好。280nm處消光系數(shù)為59710M-1 cm-1。脂肪系數(shù)為71.33,總平均親水性為-0.658。該蛋
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