靈芝木質(zhì)素降解酶系相關(guān)基因的克隆與酵母表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、白腐真菌具有較強(qiáng)降解木質(zhì)纖維素的能力,靈芝屬是白腐真菌中的一大類(lèi),對(duì)其分類(lèi),降解木質(zhì)纖維素高產(chǎn)菌株篩選方法和相關(guān)基因的系統(tǒng)研究,對(duì)利用靈芝降解木質(zhì)纖維素和環(huán)境應(yīng)用有著積極的推動(dòng)作用。
  該研究利用靈芝中的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白(FIP)基因、細(xì)胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2序列和線粒體核糖體小亞基V4-V6區(qū)(mt SSU rDNA V4-V6)序列分析了20個(gè)靈芝菌株的遺傳多樣性;在此基礎(chǔ)上建立了從靈芝中篩選漆酶高產(chǎn)菌株的方

2、法,利用外顯子拼接法和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)分別克隆了靈芝菌株漆酶(Lac)和靈芝錳過(guò)氧化酶(MnP)基因序列,并將兩個(gè)基因在畢赤酵母中進(jìn)行了表達(dá)。
  研究結(jié)果表明:
 ?、俨煌臉?biāo)記基因?qū)?duì)靈芝區(qū)分能力不同;
 ?、陟`芝00679產(chǎn)漆酶能力最強(qiáng);克隆到的靈芝00679和靈芝50817菌株漆酶cDNA全長(zhǎng)序列分別為1566bp和1563bp,編碼521和520個(gè)氨基酸,均屬于多銅氧化酶家族;構(gòu)建了靈芝00679漆酶

3、基因(GlLac)表達(dá)載體pPICZαA-GlLac,并在畢赤酵母X33中進(jìn)行了有效表達(dá);
 ?、劭寺〉降撵`芝錳過(guò)氧化物酶cDNA序列全長(zhǎng)1337bp,編碼363個(gè)氨基酸,蛋白質(zhì)包括一個(gè)木質(zhì)素氧化酶的催化位點(diǎn),屬于類(lèi)似于植物的氧化酶超家族;構(gòu)建了靈芝MnP的酵母表達(dá)載體pAO815-GlMnP,成功轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168,表達(dá)出了有活性的靈芝錳過(guò)氧化物酶。
  主要結(jié)論:使用FIP基因可區(qū)分赤芝組和紫芝組,使用細(xì)胞核核糖

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