基于Ⅰ型PKS基因的海蘆筍內生真菌的分離鑒定及其次級代謝產(chǎn)物研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Ⅰ型聚酮合成酶(Polyketide synthasesⅠ,PKSⅠ)是調節(jié)微生物次級代謝產(chǎn)物聚酮類化合物的關鍵酶,它催化合成許多具有抑菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性的化合物。因此,通過PKSⅠ基因序列分析來預測微生物產(chǎn)生的化合物結構類型,成為研究內生真菌次級代謝產(chǎn)物的新型策略。利用“基因-酶-化合物”的對應關系,目標直接指向產(chǎn)生聚酮化合物的合成基因,大大提高發(fā)現(xiàn)聚酮化合物的效率。
  本研究以野生海蘆筍為原料,采用表面消毒、PDA

2、平板分離純化得到內生真菌,通過PCR擴增篩選出四株含有Ⅰ型PKS基因的菌株,編號分別為Salicorn1、Salicorn2、Salicorn3、Salicorn4;通過系統(tǒng)發(fā)育樹分析,表明這些菌株可能具有產(chǎn)生聚酮類化合物的潛力。利用形態(tài)學與分子生物學相結合的方法將四株菌株分別鑒定為:鏈格孢菌(Alternaria alternata)、黃曲霉(Aspergillus flavus)、圓弧青霉(Penicillium cyclopium

3、)、雜色曲霉(Aspergillus versicolor)。
  對菌株Salicorn1~Salicorn4分別進行靜態(tài)發(fā)酵,將所得發(fā)酵液混合,通過溶劑分離萃取、濃縮蒸干、柱層析分離純化從發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到了四個純化合物;利用核磁共振(1HNMR,13C NMR,HMBC,HMQC,1H-1H COSY)、質譜MS等現(xiàn)代波譜技術,鑒定這些化合物結構分別是:1,5,9-trihydroxy-3,7-dimethylanthrac

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