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文檔簡介
1、銀在古代被制成各種容器可以起到抑菌作用,在納米技術發(fā)展的今天,納米銀粒同樣具有抑菌效果,且凸顯出更多的優(yōu)越性,能避免因抗生素亂用導致的微生物抗藥性。但其抑菌機制的分子機制和潛在生物安全性仍不明確,因此研究納米銀粒抑菌作用及其機制,可為納米材料的安全性評價提供更為準確的實驗參考標準。
本實驗利用市售的納米銀粒(Nanosilverparticles,Np-Ag)檢測了Np-Ag對大腸桿菌(Escherichacoli)和金黃色葡
2、萄球菌(Staphylococcusaureus)抑菌作用,并研究了對大腸桿菌的抑菌作用的分子機制。實驗采用抑菌圈和生長曲線法檢測Np-Ag對菌體的抑菌作用;利用菌體全細胞蛋白和低分子量蛋白與Np-Ag相互作用,用SDS-PAGE分析了Np-Ag與特定蛋白的選擇性靶向作用;對其中的兩條靶向蛋白進行MALDI-TOF法氨基酸序列測定;并對18.7kD蛋白基因進行克隆表達;利用體外實驗,初步研究了Np-Ag對質(zhì)粒DNA(pBV220)和目的
3、蛋白(DPS)的影響。
實驗結果表明:Np-Ag對革蘭氏陰性(E.coli)和革蘭氏陽性(S.aureus)細菌都有明顯地抑制作用,其中對革蘭氏陽性菌抑制作用更強。SDS-PAGE分析說明,無論是低分子量標準蛋白還是具體全細胞蛋白,Np-Ag與蛋白存在相互作用,并存在明顯的靶向性,這種相互作用與蛋白質(zhì)氨基酸序列的極性相關,而與蛋白質(zhì)一級結構中的氨基酸特異性序列沒有相關性。其中的兩個靶向蛋白通過MALDI-TOF測序和序列比對初
4、步顯示為E.coliDNA結合蛋白(DPS)和E.coli外膜蛋白(OMP-W)。通過設計的特異性引物PCR擴增了E.coliDPS全長基因,并構建了pBV-DPS表達載體在原核系統(tǒng)獲得表達,該蛋白為分子量18.7kD的E.coliDNA結合蛋白(DNA-bindingproteinfromstarvedcells,DPS),屬于細菌鐵結合蛋白。體外初步實驗證實,Np-Ag對質(zhì)粒DNA(pBV220)沒有明顯的吸附和降解作用,但對質(zhì)粒構
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