制藥廢水優(yōu)勢菌株的篩選及關(guān)鍵β-內(nèi)酰胺酶的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著醫(yī)藥行業(yè)的迅速發(fā)展,給人類帶來好處的同時(shí)也衍生出了一系列問題,例如制藥廢水隨意排放問題,其影響著人類生態(tài)環(huán)境和身體健康。其中,尤其是抗生素廢水的排放,因工廠在抗生素制備過程中,原材料利用率低,抗生素制備率低,導(dǎo)致工廠排放的廢水具有抗生素含量高,毒性大,顏色深,可生化性差,化學(xué)需氧量高等特點(diǎn)。雖然目前處理此類廢水的方法有許多,這些方法有些能夠?qū)ξ廴疚镞M(jìn)行吸附、沉淀;有些能夠降解小分子物質(zhì)。但吸附沉淀的方法并沒有真正涉及到物質(zhì)的降解,而

2、化學(xué)方法雖能夠水解小分子物質(zhì),但會(huì)產(chǎn)生二次污染,并且成本比較高,因此,尋找一種既經(jīng)濟(jì)、又環(huán)境友好型的方法對(duì)制藥廢水進(jìn)行處理就顯得尤為重要。
  生物酶法處理技術(shù)是利用廢水中的有機(jī)物作為惟一的碳源和氮源,利用微生物對(duì)廢水進(jìn)行降解的技術(shù)。它具有處理廢水量大、操作簡單、處理設(shè)備成本低、無二次污染以及對(duì)環(huán)境友好等特點(diǎn),尤其對(duì)小分子有機(jī)物有良好的降解效果。所以選擇生物酶法處理抗生素廢水可能是既有效、又環(huán)境友好型的一種方法。
  本文以

3、廢水中優(yōu)勢菌株的β-內(nèi)酰胺酶為研究對(duì)象,采用生物處理技術(shù),以降低廢水化學(xué)需氧量為目標(biāo),主要研究了廢水中優(yōu)勢菌株的藥物敏感性,β-內(nèi)酰胺酶的酶學(xué)性質(zhì),交聯(lián)酶聚集體固定化方法的制備工藝以及用固定化酶對(duì)廢水化學(xué)需氧量的處理。
  其主要研究成果包括:
  1)以制藥廢水中的有機(jī)物作為唯一碳源,從中篩選并鑒定出了2個(gè)生長優(yōu)勢菌株,他們分別是鮑曼不動(dòng)桿菌和變形桿菌。
  2)通過抗生素藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),這兩個(gè)菌株對(duì)高濃度的氨芐青霉素

4、耐藥,且都具有超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。
  3)我們克隆并合成了β-內(nèi)酰胺酶基因,隨后對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),最優(yōu)的誘導(dǎo)表達(dá)條件為:菌液接種量2%,Amp濃度100μg/mL,在溫度為37℃,轉(zhuǎn)速180 rpm的搖床中搖菌至OD600為0.6-0.8后,16℃靜置1.5 h,加入阿拉伯糖0.05 mg/mL,誘導(dǎo)溫度改為16℃,轉(zhuǎn)速改為100 rpm,誘導(dǎo)10小時(shí),可獲得可溶性目的蛋白。
  4)我們用交聯(lián)酶聚集體固定化方法對(duì)β-內(nèi)酰

5、胺酶進(jìn)行了固定,固定化酶回收率可達(dá)94.5%;并且在70℃高溫環(huán)境下6小時(shí)仍能保留70%的酶活;在4℃環(huán)境下保存2周仍有90%的酶活性,而游離酶在60℃高溫環(huán)境下兩個(gè)小時(shí)后酶活全部喪失,并且在4℃環(huán)境下保存30小時(shí)酶活全部喪失,因此我們可以說獲得了穩(wěn)定性高,易回收,可重復(fù)使用的酶蛋白。并且得到了最優(yōu)的固定化條件:即25 mg/mL的粗酶液1 mL,加入1/3酶量(W/W)的BSA充當(dāng)保護(hù)劑,5 mL75%的硫酸銨溶液沉淀,終濃度0.5%

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