1、隨著各種蛋白質純化技術的發(fā)展，纖維素酶的分離純化研究也取得了很大進步。纖維素酶來源廣泛，組成復雜，具有高度的底物專一性，其對纖維素的降解需要三種主要成份的協(xié)同作用才能有效地進行。對纖維素酶進一步的分離提純并系統(tǒng)研究它的酶催化反應可為研究纖維素酶的協(xié)同作用提供理論基礎，從而提高酶解效率，使纖維素資源得到有效利用，緩解日益嚴重的環(huán)境和能源問題。 非水溶液中表面活性劑性質的研究可以為進一步研究纖維素酶的膠束酶催化奠定理論基礎。一些纖維

2、素不溶于水而溶于某些有機溶劑，在非水環(huán)境中研究纖維素酶對纖維素的降解是酶催化反應新的研究方向。 具體研究內容如下： 1．內切葡聚糖酶的分離純化利用凝膠層析的方法對纖維素酶的Cx酶組分進行了分離提純，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法和DNS顯色法對分離所得的Cx酶組分的純度和酶活進行了檢驗得到活性較高的Cx酶組分。 2．內切葡聚糖酶最佳酶解條件的研究用微量量熱儀測出Cx酶降解纖維素在不同酸度和不同溫度下的熱功率一時間

3、曲線，按照熱動力學理論和對比進度法解析出反應的米氏常數(Km)和表觀最大速率(V<,max>)，建立最大速率與酸度和溫度的關系式，從而得到Cx酶催化反應的最佳酸度(pH=5.20)和最佳溫度(322.9K)。 3．常見離子對Cx酶催化反應的影響測定了在不同濃度的離子存在時的熱功率一時間曲線并進行解析，通過比較得出相同濃度的不同離子以及同一離子在不同濃度時對Cx酶催化反應的抑制與激活作用的規(guī)律。得到了Na<'+>’，Li<'+>，

4、Cd<'2+>，K<'+>，Ca<'2+>對C<,x>酶催化反應有激活作用，并且激活作用由Na<'+>到Ca<'2+>逐漸減弱；Co<'2+>，Cu<'2+>，Mg<'2+>，Ba<'2+>對C<,x>酶催化反應有抑制作用，其抑制作用由Co<'2+>到Ba<'2+>逐漸增強；Cl<'->，Si<,2>O<,8><'2->，NO<,3><'->對Cx酶催化反應有激活作用，其激活作用由Cl<'->到NO<,3><'->。逐漸減弱；SO<,4

5、><'2->和SO<,3><'2->對Cx酶催化反應有抑制作用，其抑制作用為S04}小于SO<,3><'2->。在所選濃度范圍內，激活或抑制作用均隨離子濃度的增加而增強。 5．SLA和SDS在DMF體系中膠束類型的確定十二烷基羧酸鈉(SLA)和十二烷基硫酸鈉(SDS)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)體系中的膠束均屬于O/W型膠束。 6．CMC及熱力學函數的確定及規(guī)律性用微量量熱儀測定了SLA和SDS在DMF體系中，在

6、不同溫度下和不同濃度的各種醇存在時膠束形成過程的熱功率．時間曲線。根據曲線轉折點所對應的體積，獲得臨界膠束濃度(CMC)；從曲線上的面積，求得熱效應，從而得到標準形成焓(△H<'θ><,m>)；根據△H<'θ><,m>和CMC的數據，運用表面活性劑作用原理及熱力學理論計算出△G<'θ><,m>和S<'θ><,m>。結果表明：SLA和SDS在DMF體系中，在含有相同濃度、相同碳原子數的醇時，CMC、△H<'θ><,m>和△S<'θ><,m

7、>的值隨著溫度的升高而增加，△G<'θ><,m>的值隨著溫度的升高而降低；在相同溫度及相同濃度的醇存在時，CMC、△H<'θ><,m>、△<'θ><,m>和△S<'θ><,m>的值都隨著醇中碳原子數目的增加而降低：在相同溫度下、相同碳原子數的醇存在時，CMC和△G<'θ><,m>的值隨著醇的濃度的增加而增大，而△H<'θ><,m>和△S<'θ><,m>的值隨著醇的濃度的增加而減小。 本文的創(chuàng)新之處: 1．將纖維素酶的內切

8、葡聚糖酶組分進行分離提純并單獨研究其酶催化反應為系統(tǒng)研究纖維素酶的協(xié)同作用及尋找三種主要成分之間的最佳酶配比奠定理論基礎。利用微量量熱法，根據熱動力學理論獲得熱動力學參數并用來表征Cx酶催化反應的特征及規(guī)律，確定酶催化降解纖維素的最佳條件的研究是酶催化反應研究的新課題。 2．利用微量量熱法研究非水溶液中表面活性劑，助表面活性劑及溶劑的相互作用，用測得的CMC及膠束形成過程的熱效應，得到膠束形成焓△<'θ><,m>，進而計算出△G