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![酶制劑的制備及對多環(huán)芳烴污染土壤的修復研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/2/638b6ef5-a940-4069-a4af-a8e6d266d2d8/638b6ef5-a940-4069-a4af-a8e6d266d2d81.gif)
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文檔簡介
1、多環(huán)芳烴(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)隨著化石燃料的不斷消耗在環(huán)境中積累,對生物具有極大毒性。微生物降解是環(huán)境中PAHs主要的降解方式。
本研究篩選出一株能高效降解PAHs的醋酸鈣不動桿菌21#,發(fā)酵優(yōu)化后用超聲波破碎細胞提取胞內(nèi)酶,然后篩選固定化材料對提取的粗酶進行固定,優(yōu)化固定化工藝制備高效降解PAHs的酶制劑,并研究了固定化酶制劑對多環(huán)芳烴污染土壤的修復。本課題的主要研究結
2、論有以下幾個方面:
1.以PAHs(菲、芘)為唯一碳源篩選得到PAHs高效降解菌株醋酸鈣不動桿菌,該菌株對菲和芘(均為100mg/L)的降解趨勢基本一致,都存在5d的遲滯期,從第6d開始快速降解,第10d時降解率菲的降解率達45.9%,芘的降解率達到49.3%;
2.對醋酸鈣不動桿菌的培養(yǎng)基優(yōu)化結果顯示,酵母粉為12.6g/L、蛋白胨為5.8 g/L、NaCl為5.0g/L時為最佳,用優(yōu)化后的培養(yǎng)基在30℃、轉速15
3、0rpm條件下培養(yǎng),菌體得率為16.4g/L;
3.通過單因素實驗以及Box-Behnke中心組合實驗設計,對醋酸鈣不動桿菌的破碎及PAHs降解酶的提取工藝優(yōu)化,并進行了響應面優(yōu)化分析,得到PAHs降解酶提取的最佳工藝條件為:功率320W、總超聲時間17min(工作/間歇,2s/2s)、稀釋12.5倍,在此條件下平均酶活提取率為190.48U/g;醋酸鈣不動桿菌生長曲線以及產(chǎn)酶曲線顯示,培養(yǎng)27h后菌體生長量達到最大,而酶活力
4、24 h時已達最大值,繼續(xù)培養(yǎng)酶活力不再升高;
4.研究了有機、無機材料為載體對制備酶制劑的酶活以及熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性的影響,最終確定硅藻土為固定化載體材料;通過研究給酶量對固定化酶的比活、酶結合效率、酶活力回收率及相對酶活力的影響,確定給酶量應控制在2-5mg·g-1時有較高的酶活性及酶活回收率,而以2-3mg·g-1為最佳;
5.對多環(huán)芳烴降解酶的固定化工藝進行了優(yōu)化,結果顯示,最佳固定條件為:戊二醛濃度為3.
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