1、轉(zhuǎn)錄因子E2F家族參與調(diào)控細胞周期、凋亡、分化、衰老及多倍體化等重要生物學(xué)過程，與人類腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。E2F家族成員根據(jù)其結(jié)構(gòu)和功能的不同可分為典型性和非典型性兩類，典型性的E2F成員E2F1-6，它們都含有與DP蛋白等作用的結(jié)構(gòu)域，受RB-E2F信號通路的調(diào)控;非典型性E2F成員E2F7、E2F8，它們不與DP蛋白等作用，僅含有兩個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，不受RB的調(diào)控。
　　本文在課題組前期關(guān)于非典型性E2F家族成員在人類肝細

2、胞癌生長中作用的研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，進一步探討非典型E2F家族成員E2F7和E2F8基因?qū)Ω伟┘毎只挠绊懠跋嚓P(guān)分子機制。通過能夠體外富集腫瘤干細胞的細胞成球培養(yǎng)技術(shù)。我們觀察了E2F7和E2F8基因?qū)Ω伟┘毎鸋ep-3B、Huh-7成球培養(yǎng)條件下的克隆形成能力影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含E2F7、E2F8基因的腺病毒載體能夠顯著抑制Hep-3B細胞成球培養(yǎng)條件的克隆形成能力;相反，特異性干擾E2F8的腺病毒載體則能夠顯著促進Hep-3B細胞成球

3、培養(yǎng)條件下的克隆形成能力。同時，我們通過定量PCR、Western blotting技術(shù)檢測了E2F7、E2F8基因在肝癌細胞中表達受到干擾時，NANOG、SOX2、OCT-4基因表達上升。當E2F7、E2F8基因表達上調(diào)時，相關(guān)干細胞表面標志物表達下降。這些結(jié)果說明了非典型性E2F家族成員在肝癌的分化中發(fā)揮作用。為了進一步深入研究它們在肝癌分化中涉及的分子機制，我們研究了E2F7、E2F8基因與細胞分化相關(guān)的PcG復(fù)合物、Wnt通路之

4、間的關(guān)系。Western Blot檢測分析E2F7、E2F8在肝癌細胞中過表達對PcG復(fù)合物中主要成員EZH2及其底物H3K27me3改變情況。結(jié)果顯示過表達E2F7、E2F8可以抑制EZH2及其底物H3K27me3的表達。免疫共沉淀實驗顯示外源性的E2F7、E2F8可以與肝癌細胞中內(nèi)源性的EZH2相互作用。此外，利用TOP/FOP報告基因檢測系統(tǒng)、實時熒光定量PCR、免疫熒光技術(shù)分析了E2F7、E2F8對Wnt信號通路活性、β-cat