1、蛋白質(zhì)賴氨酸乙?；揎検且环N重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，乙酰化酶和去乙?；敢黄鸸餐{(diào)節(jié)乙酰化修飾水平的高低。乙?；揎椀漠惓?，引起基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)失控，進(jìn)而改變代謝酶活性，影響蛋白-蛋白相互作用以及蛋白穩(wěn)定性，引發(fā)細(xì)胞增殖失常，最終誘導(dǎo)產(chǎn)生發(fā)育、增殖相關(guān)的重大疾病及相關(guān)癌癥。因此研究疾病不同時(shí)期，蛋白質(zhì)乙酰化修飾水平高低變化的意義非常重大:一方面可用于研究在相關(guān)疾病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的不同階段，不同修飾水平的乙酰化對(duì)于疾病的影響，篩選潛在的診

2、斷標(biāo)志物，用于早期診斷病況;另一方面從乙?；揎椥盘?hào)途徑和生物系統(tǒng)的角度揭示肝癌轉(zhuǎn)移機(jī)理，發(fā)展針對(duì)肝癌治療的潛在靶向藥物。由此可見，開發(fā)快速、靈敏檢測(cè)乙?；鄬?duì)含量的技術(shù)手段非常必要。
　　蛋白質(zhì)芯片技術(shù)作為一種新的技術(shù)，采用微陣列方法，能夠?qū)悠返鞍讓?shí)現(xiàn)高通量、高靈敏度、高特異性的分析，受到了廣泛關(guān)注。它不僅是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中強(qiáng)有力的工具，也是應(yīng)用于臨床疾病早期診斷、評(píng)測(cè)預(yù)后和治療效果的新手段。其研究成果拓寬了與人類健康更加貼近

3、的應(yīng)用領(lǐng)域，為生命科學(xué)的發(fā)展提供更有力的技術(shù)支持。
　　本論文工作的主要貢獻(xiàn):針對(duì)蛋白質(zhì)乙?；垦芯恐幸阴；贵w親和性弱的弊端，首次建立了利用蛋白抗體芯片對(duì)乙酰化修飾水平進(jìn)行相對(duì)定量的研究平臺(tái)，開辟了一條高通量分析蛋白質(zhì)乙酰化修飾差異譜的新途徑;利用建立的乙?；酒脚_(tái)，檢測(cè)正常人和肝癌病人血清中一種腫瘤疾病標(biāo)志物（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，VEGF）乙酰化水平的變化情況，對(duì)其乙酰化水平進(jìn)行了相對(duì)定量分析。該技術(shù)為快速、高靈敏、高通量分

4、析臨床樣品提供了有力的手段。同時(shí)本論文利用實(shí)驗(yàn)室合成的材料PUF固定酶，制備微流控生物反應(yīng)器。固定蛋白酶，通過摸索酶解標(biāo)準(zhǔn)蛋白的相應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件，再應(yīng)用于實(shí)際樣品檢測(cè)，大大提高了酶解效率。
　　本論文的第一章綜述了目前的蛋白質(zhì)組學(xué)和翻譯后修飾研究狀況，重點(diǎn)介紹了蛋白質(zhì)翻譯后乙?；揎椀难芯窟M(jìn)展情況以及相應(yīng)的研究手段;介紹了蛋白芯片技術(shù)，包括蛋白芯片制備和分析應(yīng)用等方面的研究進(jìn)展，以及蛋白芯片用于定性定量研究蛋白和翻譯后修飾水平的研究;

5、概述蛋白質(zhì)組學(xué)用于肝癌研究的進(jìn)展?fàn)顩r，說明本論文的選題目的和意義。
　　本論文的第二章建立蛋白抗體芯片定量檢測(cè)蛋白乙?；郊夹g(shù)。利用蛋白特異性抗體作為捕獲抗體，蛋白抗體和乙?；贵w為檢測(cè)抗體，高效、快速檢測(cè)目標(biāo)蛋白的乙?；?。該陣列蛋白芯片技術(shù)中，固相基質(zhì)上結(jié)合牛血清白蛋白抗體(Anti-BSA antibody)作為捕獲抗體制備得到蛋白芯片，優(yōu)化芯片反應(yīng)條件，通過檢測(cè)抗體(Bio-anti-BSA antibody)檢測(cè)混合

6、樣品中乙?；呐Ｑ灏椎鞍?BSA-Ac)中乙?；?。同時(shí)利用蛋白檢測(cè)抗體和乙?；贵w作為檢測(cè)抗體，同步檢測(cè)BSA-Ac和BSA混合物中蛋白含量和乙?；剑⒌鞍仔酒鄬?duì)定量檢測(cè)乙?；降募夹g(shù)平臺(tái)。這個(gè)方法能夠擴(kuò)展應(yīng)用于疾病生物標(biāo)志物的乙?；綑z測(cè)。
　　本論文的第三章利用了已建立的乙?；鞍仔酒夹g(shù)研究正常人以及肝癌病人血清中血管成長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白含量和乙?；健Ｍㄟ^正常人及肝癌病人血清中的VEGF蛋白含量與乙

7、?；奖戎档牟町?，證明了乙?；鞍仔酒夹g(shù)的實(shí)用性。該方法將進(jìn)一步擴(kuò)展應(yīng)用于甲胎蛋白(AFP)，觸珠蛋白(Haptoglobin)等肝癌疾病標(biāo)志物，通過檢測(cè)其乙?；谋磉_(dá)水平差異，為應(yīng)用于早期診斷和個(gè)性化治療乙?；揎棶惓Ｒ鸬募膊￠_辟一條新的道路。
　　本論文的第四章利用PUF固定酶，制備微流控生物反應(yīng)器。PUF的生物兼容性增強(qiáng)了固定酶的穩(wěn)定性。其最大的優(yōu)勢(shì)是消耗時(shí)間(＜10s)，樣品和試劑比較少。由于PUF包含大量的反應(yīng)基團(tuán)