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![基于磁性微粒的萊克多巴胺檢測(cè)和DNA純化方法的建立.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/7/23/76470f8f-e506-4dc8-a4f0-3eb59e7e52d2/76470f8f-e506-4dc8-a4f0-3eb59e7e52d21.gif)
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1、磁性微粒是超順磁性納米粒子與有機(jī)或無(wú)機(jī)材料通過(guò)包覆、交聯(lián)等方式而形成的納微米級(jí)復(fù)合粒子。磁性微粒具有超順磁性、較高的比表面積、可修飾功能基團(tuán)等特性。因此,將抗原/抗體、酶、核酸/寡核苷酸、小分子藥物等固定在其表面,可用于免疫學(xué)檢測(cè)、核酸純化、細(xì)胞分選、藥物載體和酶的固定化等生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。分別以?xún)煞N不同的磁性微粒(金磁微粒和羧基末端硅烷化磁性微粒)為載體,本研究建立了苯酚型β-興奮劑萊克多巴胺的檢測(cè)方法和從生物樣品中方便、快速純化。D
2、NA的方法。 具有組裝結(jié)構(gòu)的金磁微粒(Fe<,3>O<,4>/Au)是結(jié)合磁性氧化物粒子和膠體金特點(diǎn)的復(fù)合微粒,兼有在外磁場(chǎng)中可分離及生物分子快速固定化等特點(diǎn)。將萊克多巴胺與卵清蛋白的偶聯(lián)物(RCT-OVA)固定在金磁微粒表面,利用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(IC-EIASA)的原理建立了萊克多巴胺定量分析方法并用于動(dòng)物尿液、飼料和組織中的萊克多巴胺含量的測(cè)定。對(duì)抗原在金磁微粒表面的固定化濃度、單克隆抗體稀釋度等條件進(jìn)行優(yōu)化,繪制
3、了萊克多巴胺測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定了方法的檢測(cè)限、回收率等參數(shù),同時(shí)對(duì)萊克多巴胺與其它β-興奮劑的交叉反應(yīng)率也進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明:在1~100 ppb的濃度范圍內(nèi)方法的線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.993,最低檢測(cè)限為0.668 ppb;回收率在72.6~106.2%之間,變異系數(shù)不超過(guò)13.4%。其它β-興奮劑與RCT抗體交叉反應(yīng)率均很低。整個(gè)反應(yīng)(包括樣品制備)可在4 h內(nèi)完成。與市售酶標(biāo)板為載體的檢測(cè)試劑盒相比較,金磁微粒作為固相載
4、體可提高檢測(cè)的靈敏度,同時(shí)線性關(guān)系、最低檢測(cè)限、回收率和變異系數(shù)等參數(shù)符合免疫學(xué)檢測(cè)要求,本方法可用于尿液、飼料和組織中萊克多巴胺含量的測(cè)定。 本論文以表面含有羧基的硅烷化磁性微粒為載體,系統(tǒng)開(kāi)展了從全血和唾液中純化基因組DNA,從大腸桿菌中純化質(zhì)粒DNA的方法研究。對(duì)裂解液的組成、磁性微粒的種類(lèi)及用量、固定體系中固定緩沖液的體積比等參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,建立了小規(guī)模較為穩(wěn)定的從全血中純化基因組 DNA、從細(xì)菌中純化質(zhì)粒DNA的方法,
5、并對(duì)DNA得率、重復(fù)性、批間差等進(jìn)行了測(cè)定。本論文初步建立了從唾液中純化DNA的方法。結(jié)果表明:0.1 mg羧基磁性微??捎糜诩兓?00μL全血的基因組DNA,得率在3~7μg之間,OD<,260>/OD<,280>在1.7~1.9之間,CV值小于8%。DNA產(chǎn)率高于國(guó)內(nèi)試劑盒的指標(biāo),可與國(guó)外產(chǎn)品媲美;初步建立了0.1 mg羧基磁性微粒純化200 μL唾液中的基因組DNA的方法,得率在0.5-4μg之間;0.2 mg羧基磁性微??捎糜诩?/p>
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