1、目的:
　　類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是以關節(jié)滑膜炎、血管翳的形成、軟骨及骨侵蝕破壞為主要病理改變的一種病因尚未明確的慢性炎癥性自身免疫系統(tǒng)疾病。隨著對RA疾病研究的深入，發(fā)現(xiàn)RA成纖維樣滑膜細胞(RA-FLS)遷移及侵襲能力的增強在RA的發(fā)病機制中起重要作用。血小板微顆粒（Platelet microparticles，PMPs）是血小板活化后脫落的胞膜顆粒。本課題組前期工作及文獻報道顯示RA

2、患者外周血與關節(jié)腔中PMPs均異常增高，且PMPs的水平與RA疾病活動性相關，提示PMPs在RA的疾病的發(fā)生及發(fā)展中起一定作用。我們前期工作已發(fā)現(xiàn)PMPs可通過激活NF-κB通路，上調RA-FLS中MMP1的表達，進而促進了RA-FLS遷移及侵襲。本研究的目的是明確PMPs中促進RA-FLS遷移、侵襲的主要活性成份，并探究其作用機制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞(MH7A)，采用流式細胞儀以FIT

3、C標記的鼠抗人CD90、PE標記的鼠抗人CD55抗體進行細胞鑒定。
　　2.選取新鮮機采富血小板血漿，使用ADP活化血小板，提取PMPs，并使用流式細胞儀以PE標記的鼠抗人CD41抗體進行純度測定，進行定量。
　　3.通過蛋白質譜分析PMPs中的主要成分。
　　4.應用CCK-8試劑盒檢測各種趨化因子受體拮抗劑對RA-FLS細胞活力的影響。
　　5.利用細胞劃痕、Transwell細胞遷移和侵襲實驗探究各種趨化因

4、子受體拮抗劑對PMPs誘導的RA-FLS遷移、侵襲能力的影響。
　　6.通過高通量基因芯片檢測PMPs對RA-FLS中相關基因表達的影響。使用RT-qPCR從mRNA水平、Western Blot從蛋白水平驗證基因芯片的結果。
　　7.使用Western Blot方法研究PMPs促進RA-FLS遷移、侵襲的主要活性成份及其作用機制。
　　研究結果:
　　1.流式細胞儀鑒定MH7A的CD90、CD55的陽性表達率為

5、95.6±1.36％(n=3)，確定其性質，可用于后期實驗。
　　2.流式細胞儀鑒定，提取的PMPs純度達93.4±1.46％(n=3)，可用于后期實驗。
　　3.PMPs蛋白組學分析結果顯示PMPs中含有5256種蛋白，GO分析表明這些蛋白質涉及到生物學過程、細胞組成、分子功能和信號通路等方面。PMPs中含有多種與細胞遷移及侵襲相關的趨化因子，如CCL5、CCL23、CXCL4及CXCL7等。
　　4.CCK-8細胞

6、活力檢測實驗結果表明實驗選擇的受體拮抗劑BX471(CCR1拮抗劑)、AMG487（CXCR3拮抗劑）、STI571（CXCR3拮抗劑）、SB225002（CXCR2拮抗劑）對細胞活力均無明顯影響（P＞0.05）。
　　5.細胞劃痕、Transwell細胞遷移實驗表明BX471、AMG487、STI571對PMPs促進RA-FLS遷移的作用無明顯影響(P＞0.05);SB225002具有部分阻斷PMPs促進RA-FLS遷移的作用(

7、P＜0.05)。
　　6.Transwell細胞侵襲實驗表明SB225002具有部分阻斷PMPs促進RA-FLS侵襲的作用（P＜0.05）。
　　7.高通量基因芯片檢測顯示25μg/ml及50μg/ml PMPs明顯上調了RA-FLS中CXCL5的mRNA的表達。RT-qPCR、Western Blot檢測證實PMPs可上調RA-FLS中CXCL5的表達(P＜0.05)。
　　8.Western Blot實驗結果顯示S

8、B225002可下調RA-FLS中p-IκB、p-NF-κB(P＜0.05);PMPs一方面可以下調RA-FLS中IκB的表達，另一方面可以上調RA-FLS中p-IκB的表達，而SB225002+50μg/ml PMPs組與50μg/ml PMPs組相比上調RA-FLS中IκB的表達，且下調RA-FLS中p-IκB的表達(P＜0.05);PMPs可上調RA-FLS中p-NF-κB的表達，SB225002+50μg/ml PMPs組與50