1、目的：通過對葡激酶蛋白（SAK，S）基因序列進行定點突變，然后在多種條件下對突變蛋白進行聚乙二醇修飾，篩選出最優(yōu)修飾條件。并通過分子篩分離得到較高純度修飾蛋白,并對其生物活性進行初步驗證。
　　方法：根據(jù) S蛋白晶體結(jié)構(gòu)及抗原位點選擇突變位點，設(shè)計突變引物，將 S蛋白上選定的氨基酸突變?yōu)榘腚装彼幔粚⑼蛔冑|(zhì)粒通過化學(xué)轉(zhuǎn)化進 BL21(DE3)感受態(tài)，并利用經(jīng)典原核表達(dá)技術(shù)，在大腸桿菌中表達(dá)突變蛋白S-cys；利用離子親和層析、離子交

2、換層析、分子篩等方法分離純化目的蛋白；對目的蛋白在不同條件下進行聚乙二醇修飾，觀察并評價修飾溫度、修飾時間、蛋白質(zhì)：修飾劑摩爾比等因素對修飾率的影響；二次分離，將修飾蛋白與未成功修飾蛋白分離開來，得到較高純度的修飾蛋白 peg-S-cys，并通過纖維蛋白平板溶圈實驗和動物栓塞模型的構(gòu)建初步對其生物活性進行驗證。
　　結(jié)果：①成功將選定氨基酸突變?yōu)榘腚装彼帷＂谠吮磉_(dá)、純化后得到了純度較高的S-cys蛋白。③在多種條件下對S-cys