1、目的：LMNA基因及其編碼蛋白lamin A/C異常能引起一組人類(lèi)遺傳病,稱(chēng)為核纖層蛋白病,哺乳動(dòng)物中 LMNA基因有4個(gè)轉(zhuǎn)錄本,分別是 laminA、laminC、laminA10,laminC2,其中 laminA、laminC是主要的亞型,目前已證明脊椎動(dòng)物中該基因與哺乳動(dòng)物同源性較高,而在斑馬魚(yú)已成功克隆出laminA基因,laminC基因尚未克隆出,本實(shí)驗(yàn)利用3’RACE技術(shù)克隆斑馬魚(yú)laminC基因，以確定斑馬魚(yú)中LMNA基

2、因不同的轉(zhuǎn)錄本，為進(jìn)一步研究LMNA基因轉(zhuǎn)錄本的功能，奠定重要的基礎(chǔ)。
　　方法:通過(guò)收集斑馬魚(yú)全時(shí)相的胚胎,利用trizol方法提取RNA,后根據(jù)3’race試劑盒所帶的逆轉(zhuǎn)錄體系將所提取的total RNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA。然后再使用TaKaRa LA Taq以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，進(jìn)行套式PCR反應(yīng)，套式PCR（巢式PCR）通過(guò)兩輪PCR反應(yīng),使用兩套引物擴(kuò)增特異性的DNA片段,第二套引物功能特異性擴(kuò)增位于首輪PCR產(chǎn)物

3、的一段DNA片段,從而提高反應(yīng)的特異性。最后將PCR產(chǎn)物直接送測(cè)序。
　　結(jié)果：成功運(yùn)用巢式PCR方法克隆基因，得到了581bp的片段,并進(jìn)行了測(cè)序,測(cè)序結(jié)果與laminA基因相似度達(dá)98％,未克隆到laminC基因。
　　結(jié)論：通過(guò)新實(shí)驗(yàn)技術(shù)驗(yàn)證了斑馬魚(yú)中可能只存在laminA基因,無(wú)laminC基因,但因目前l(fā)aminA/C的剪接位點(diǎn)是針對(duì)哺乳動(dòng)物的，斑馬魚(yú)是一種較低等的脊椎動(dòng)物，所以可能斑馬魚(yú)中l(wèi)aminC的可變剪接位