腺相關病毒介導BMP-7和SOX9體外共同轉染人退變椎間盤生物學效應的觀察.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建骨形成蛋白-7(BMP7)腺相關病毒載體質(zhì)粒pAAV-hBMP7-IRESZsGreen和SOX9腺相關病毒載體質(zhì)粒pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato并進行腺相關病毒包裝,體外共同轉染人椎間盤細胞評價其生物學效應。
　　 方法:用分子克隆技術從質(zhì)粒pUC57-hBMP-7獲得BMP-7cDNA并克隆至AAV包裝質(zhì)粒pAAV-IRES-ZsGreen上,構建成pAAV-hBMP7-IRES-ZsGreen的

2、AAV重組質(zhì)粒,經(jīng)酶切及測序鑒定后,由深圳百恩維公司對pAAV-hBMP7-IRES-ZsGreen進行包裝;同法獲得SOX9過表達腺相關病毒pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato的包裝;AAV-BMP-7與AAV-SOX9聯(lián)合轉染人退變的椎間盤纖維環(huán)細胞,Westernblotting檢測BMP-7與SOX9蛋白表達以及髓核細胞Ⅱ型膠原表達量的變化。
　　 結果:經(jīng)酶切鑒定及基因測序證實AAV包裝質(zhì)粒pAAV-hBM

3、P7-IRES-ZsGreen與pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato構建完成,熒光免疫組化顯示BMP-7與SOX9蛋白表達,百思維公司包裝出具有生物學功能的AAV-BMP-7,AAV-SOX9構建成功。Westernblotting顯示BMP-7與SOX9在纖維環(huán)細胞中表達,AAV-BMP-7與AAV-SOX9雙基因聯(lián)合轉染的纖維環(huán)細胞Ⅱ型膠原表達量明顯較AAV-BMP-7與AAV-SOX9基因轉染的細胞Ⅱ型膠原表達量多。<

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