1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文沉默維生素D結(jié)合蛋白基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響StudiesoftheinfluenceofT24bladdercancercell’Sbiologicabet晦viorbysilencingtheVitamine—Dbindingproteingene課題來(lái)源：自選學(xué)位申請(qǐng)人陳定南導(dǎo)師姓名譚萬(wàn)龍教授專業(yè)名稱泌尿外科培養(yǎng)類型臨床型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學(xué)院南方醫(yī)院2013年3月20日廣州摘要

2、的表達(dá)，特別是蛋白的表達(dá)，因而調(diào)控DNA的功能，在腫瘤的形成過(guò)程中越來(lái)越受到重視【l引。雖然在醫(yī)學(xué)上的提高和監(jiān)測(cè)膀胱癌的早期檢出率仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。而我們最近研究發(fā)現(xiàn)，維生素D結(jié)合蛋白(VitaminDBindingProtein，又稱為DBP或GC蛋白，以下簡(jiǎn)稱GC蛋白)可以作為一個(gè)新的尿源性標(biāo)志物16J，在早期的膀胱尿路上皮癌的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)中發(fā)揮重要的作用，并有可能成為將來(lái)早期診斷膀胱癌的重要方法。但維生素D結(jié)合蛋白在膀胱移行上皮

3、癌細(xì)胞中的作用尚未被闡明，所以有必要對(duì)該蛋白在膀胱癌細(xì)胞中發(fā)揮的作用作進(jìn)一步的研究和探討。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕緦?shí)驗(yàn)旨在1研究GC蛋白在膀胱癌T24細(xì)胞株與正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)的差異；2通過(guò)RNAi干擾的方法，沉默膀胱癌T24細(xì)胞GC基因，下調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞GC蛋白的表達(dá)，并進(jìn)一步研究其對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。方法：第一部分：1細(xì)胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細(xì)胞株及正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞作為對(duì)照組進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，分為膀胱癌細(xì)胞組和正常

4、膀胱粘膜上皮細(xì)胞組。2分別對(duì)兩組細(xì)胞提取總蛋白，應(yīng)用免疫印跡法，經(jīng)過(guò)蛋白電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉雜交及曝光檢測(cè)GC蛋白在膀胱癌T24細(xì)胞株中的表達(dá)與該蛋白在正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞株中表達(dá)的差異。第二部分：1細(xì)胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細(xì)胞株分為GCsiRNA組作為實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組共三組，其中GCsiRNA組應(yīng)用RNAi的方法，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA干擾片段，沉默膀胱癌T24細(xì)胞維生素D結(jié)合蛋白基因(簡(jiǎn)稱GC基因)的表達(dá)；陰性對(duì)照組用脂