1、慢病毒載體(Lentiviral vector)是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒(HIV-1)為基礎發(fā)展起來的基因載體。慢病毒載體和一般逆轉錄病毒載體的明顯區(qū)別是對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，能有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。該載體能夠通過整合宿主DNA的方式使目的基因長期而穩(wěn)定的表達。此外，慢病毒載體還具有攜帶外源基因片段較大，免疫原性小，安全性高等優(yōu)點，為細胞水平和整體水平的轉基因研究提供了

2、更強有力的工具。
　　 細胞免疫在腫瘤免疫中起主要作用。CD8+T淋巴細胞識別腫瘤抗原受人類白細胞抗原Ⅰ類分子(HLA-Ⅰ)的限制。特異性CD8+T淋巴細胞的活化必須首先利用T細胞抗原受體識別抗原遞呈細胞或腫瘤細胞表面表達的HLA-Ⅰ類分子遞呈的抗原肽，獲得活化的第一信號，然后通過共刺激分子受體和配體的結合獲得第二信號。腫瘤過繼免疫治療通常采用自體抗原提呈細胞活化T細胞，限制了其在臨床的運用。而人工抗原提呈細胞(artifici

3、al antigen presenting cell，aAPC)具有易培養(yǎng)、活化條件易控制、T細胞活化增殖周期短等優(yōu)點，故近年來對人工抗原提呈細胞的研究日趨活躍。
　　 我們在本實驗室原有工作的基礎上，設想構建一個單鏈三聚體(sinvie chaintrimer，SCT)重組融合基因，將MHCⅠ分子、β2m和抗原肽的基因片段以適當?shù)慕宇^(linker)串聯(lián)在一起，然后將其克隆進慢病毒載體。利用慢病毒載體將該新型的SCT基因穩(wěn)定轉

4、染本實驗室制備的人工抗原遞呈細胞(artificial antigen-presentingcells，aAPC)K562/4-1BBL/CD86細胞株，使其成為一個既能向抗原特異性CD8+T細胞提供共刺激信號(即第二信號)，又能通過MHC分子同時向CD8+細胞提供特異性抗原肽的信號(即第一信號)的人工抗原遞呈細胞。
　　 在本研究中，我們選用的MHC-Ⅰ類分子為HLA-A*0201，抗原表位為PR1(VLQELNVTV)。PR

5、1是人類髓系白血病的腫瘤相關抗原蛋白酶3中的一條HLA-A*0201限制性的、強免疫原性多肽，其誘導的免疫反應具有顯著抗髓系白血病作用。我們首先利用基因工程技術將PR1肽、β2m及HLA-A*0201以(G4S)n柔性linker依次串聯(lián)，構建PR1-HLA-A*0201-SCT融合基因，再克隆至慢病毒載體系統(tǒng)表達質粒中，測序正確后將HIV-1來源的慢病毒載體系統(tǒng)三質粒共轉染293T包裝細胞。收獲細胞培養(yǎng)上清，得到具有一次感染能力而無復