1、實驗目的:
　　探討1-甲基乙內(nèi)酰脲單獨應用及與5-氟尿嘧啶聯(lián)合對人結(jié)腸癌SW480細胞增殖的抑制和誘導凋亡作用。
　　實驗方法：
　　以體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌SW480細胞株為實驗研究對象。實驗分為對照組（等量PBS）、1-甲基乙內(nèi)酰脲組(M)、5-氟尿嘧啶組(Fu)、甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合組(M＋Fu)共四大組。
　　1.MTT比色法檢測細胞增殖抑制率：
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞增殖的

2、抑制作用：根據(jù)文獻數(shù)據(jù)和預實驗，將1-甲基乙內(nèi)酰脲組設(shè)八個濃度組(M：0.5mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg·L-1、50mg·L-1、100mg·L-1、200mg·L-1、500mg·L-1）；1-甲基乙內(nèi)酰脲八個濃度組分別干預人結(jié)腸癌SW480細胞24、48、72小時后，MTT法檢測1-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞增殖的抑制作用。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-氟尿嘧啶分別應用對SW480細胞增殖的抑制

3、作用：根據(jù)文獻數(shù)據(jù)和預實驗將1-甲基乙內(nèi)酰脲、5-氟尿嘧啶分別設(shè)四個相同濃度組，以利比較抑制效果。各組分別為 M10mg·L-1、M20mg·L-1、M50mg·L-1、M100mg·L-1；Fu10mg·L-1、Fu20mg·L-1、Fu50mg·L-1、Fu100mg·L-1。上述各濃度組分別干預人結(jié)腸癌SW480細胞，48小時后MTT法檢測各濃度組對SW480細胞增殖抑制作用。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用對

4、SW480細胞增殖的抑制作用：1-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用設(shè)四個組：M10mg·L-1＋Fu10mg·L-1、M20mg·L-1＋Fu20mg·L-1、M50mg·L-1＋Fu50mg·L-1、M100mg·L-1＋Fu100mg·L-1。上述各濃度組分別干預人結(jié)腸癌 SW480細胞，48小時后 MTT法檢測各組對SW480細胞增殖抑制作用，并與單獨應用5-Fu作用進行比較。
　　2.顯微鏡下細胞形態(tài)學觀察：
　　

5、為了觀察1-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞增殖抑制作用的形態(tài)學效果，應用1-甲基乙內(nèi)酰脲和5-氟尿嘧啶分別干預SW480細胞，在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變，HE染色后顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細胞形態(tài)變化。
　?、費100 mg·L-1、Fu100 mg·L-1分別干預人結(jié)腸癌SW480細胞24、48、72小時后，顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細胞形態(tài)變化并攝像。
　?、贛50mg·L-1、Fu50mg·L-1分別干預結(jié)腸癌S

6、W480細胞，48小時后HE染色，顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細胞形態(tài)變化并攝像。
　　3.流式細胞儀檢測細胞凋亡及細胞周期分布：
　　為了檢測1-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞凋亡及細胞周期分布的影響，應用1-甲基乙內(nèi)酰脲和5-氟尿嘧啶干預SW480細胞，各組分別干預SW480細胞48小時后，F(xiàn)CM檢測細胞凋亡率及細胞周期分布。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲二個濃度組：M20mg·L-1、M50mg·L-1；
　　②5

7、-氟尿嘧啶一個濃度組：Fu20mg·L-1；
　　③1-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合二個濃度組：M20mg·L-1＋Fu20mg·L-1、M50mg·L-1＋Fu20mg·L-1；
　　實驗結(jié)果：
　　1. MTT法檢測結(jié)果顯示：
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲在5～500 mg·L-1濃度范圍能抑制SW480細胞增殖，增殖抑制率呈濃度遞增趨勢。各組間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)。
　　②1-甲基乙內(nèi)酰脲

8、單獨應用時，作用于結(jié)腸癌 SW480細胞48小時后，對SW480細胞增殖抑制作用最強。
　?、?0、20mg·L-11-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞的抑制作用與等濃度的5-Fu作用相比，差異無顯著性(P＞0.05)；50、100mg·L-11-甲基乙內(nèi)酰脲對SW480細胞的抑制作用不及等濃度5-Fu，差異有顯著性(P＜0.05)。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲和5-FU聯(lián)合應用對腫瘤細胞的增殖抑制作強于單獨應用相等濃度的1-甲基乙

9、內(nèi)酰脲、5-Fu，差異有顯著性(P＜0.05)。
　?、軲10mg·L-1＋Fu10mg·L-1對SW480細胞增殖抑制作用與5-Fu20mg·L-1單獨應用效果相當，差異無顯著性(P＞0.05)；M50mg·L-1＋Fu50mg·L-1對SW480細胞增殖抑制作用強于5-Fu100 mg·L-1(P＜0.05)。
　　2.顯微鏡下觀察各實驗組細胞形態(tài)改變:
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu連續(xù)處理的SW480細胞在顯

10、微鏡下觀察均顯示細胞體積變小，細胞形態(tài)變圓，細胞異形性減少，細胞核體積變小，核仁數(shù)目減少，染色變淡，細胞間連接變疏松，部分細胞不再貼壁。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu連續(xù)處理的SW480細胞HE染色后顯微鏡下觀察均顯示細胞變圓且分散，細胞體積縮小，細胞漿濃縮，核染色變淡，核仁數(shù)減少；部分細胞核膜消失、細胞溶解碎裂。
　　3.FCM結(jié)果顯示：與對照組相比，1-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu各處理組 SW480細胞凋亡率增加，細胞周

11、期分布中S期細胞分布增多，差異具有顯著性(P＜0.05)。與Fu20mg·L-1組相比,聯(lián)合應用組處理的SW480細胞凋亡率增加，細胞周期分布中S期細胞分布增多，差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.1-甲基乙內(nèi)酰脲在體外對人結(jié)腸癌SW480細胞有抑制增殖及誘導細胞凋亡的作用。
　　2.低濃度時，1-甲基乙內(nèi)酰脲抑制人結(jié)腸癌 SW480細胞增殖的效果與5-Fu相當；高濃度時，1-甲基乙內(nèi)酰脲抑制人結(jié)腸癌