1、該論文以一株編號為2B的苦皮藤內(nèi)生真菌為出發(fā)菌株,應(yīng)用形態(tài)學的方法鑒定了其種屬地位;研究了其代謝產(chǎn)物的農(nóng)用生物活性,并對目標活性物質(zhì)進行分離和結(jié)構(gòu)解析,采取誘變育種手段選育了高產(chǎn)菌株,并對高產(chǎn)菌株的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化.通過試驗結(jié)果的分析和討論,取得了以下結(jié)論:1、根據(jù)真菌的分類及鑒定方法,用光學顯微鏡觀察2B菌株氣生菌絲、大型分生孢子、小型分生孢子及菌落性狀,對比相關(guān)分類系統(tǒng),將2B菌株鑒定為層出鐮刀菌(Fusarium prolife

2、ratum).2、在對2B菌株發(fā)酵產(chǎn)物生物活性研究中,發(fā)現(xiàn)2B菌株發(fā)酵產(chǎn)物甲醇提取物有明顯的抑菌活性,在1000μg·mL<'-1>濃度下對番茄早疫病菌(Alternaria solani)、煙草赤星病菌(Alternaria alternata)、小麥根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)4種供試菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制率均大于80%;在盆栽試驗中,對黃瓜霜霉

3、病菌(Pseudoperonospora cubensis)的治療和保護作用均在70%以上.3、采用常壓柱層析、HPLC制備等方法,在生物活性追蹤指引下,從2B菌株發(fā)酵產(chǎn)物分離出4個化合物2B-1,2B-2,2B-3,2B-4.經(jīng)波譜技術(shù)(IR,<'1>H NMR,<'13>C NMR,COSY,MS),結(jié)合化學檢驗方法,并與相關(guān)文獻對比,將分離得到的化合物分別鑒定為enniatin B,enniatin B<,1>,enniatin

4、A<,1>,ergosterin.化合物2B-1,2B-2,2B-3在100μg·mL<'-1>濃度下,對玉米大斑病原菌菌絲生長抑制率分別為68.18%,87.49%,90.91%.4、建立了恩鐮孢菌素(enniatins)的HPLC檢測方法.檢測條件為色譜柱(C18柱,0.9×30cm,10μm);流動相(V:V)甲醇:水(88:12);流速1mL·min<'-1>;檢測波長UV229nm;室溫下5μL進樣,該方法相對標準偏差RSD<

5、1%,平均回收率在98%以上.5采用紫外線(UV),甲基磺酸乙酯(EMS),超聲波+UV+EMS 3種誘變方式進行復(fù)合誘變,同時結(jié)合形態(tài)變異與產(chǎn)量之間的相關(guān)關(guān)系,挑選形態(tài)差異明顯的單菌落,然后通過搖瓶發(fā)酵篩選enniatins高產(chǎn)菌株,通過3輪誘變篩選大幅度提高了菌種的生產(chǎn)能力,最后得到的突變株UE152代謝enniatinns總產(chǎn)量為59.72mg·100mL<'-1>,是出發(fā)菌株搖瓶效價2.9倍,且該突變株的高產(chǎn)遺傳特性穩(wěn)定.6、通

6、過單因子試驗和多因子正交試驗篩選獲得UE152菌株最佳的搖瓶培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件為葡萄糖2%、土豆20%、蛋白胨0.5%、NH<,4>Cl0.3%、MgS0<,4>0.1%和CaCO<,3>0.1%,培養(yǎng)溫度26℃,接種量10塊菌餅(每50mL發(fā)酵液),初始pH值為6.0~7.0,裝液量50mL(每250mL三角瓶),轉(zhuǎn)速160rpm,發(fā)酵時間120h.在上述實驗條件下enniatinns總產(chǎn)量可達88.68mg·100mL<'-1>,