1、蟲(chóng)草類真菌常具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗病原、抗氧化、抗輻射、殺蟲(chóng)、鈣離子拮抗及增強(qiáng)人體免疫能力等功能，它們?cè)卺t(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)及現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。近年來(lái)由于人類對(duì)自然環(huán)境的破壞和對(duì)野生蟲(chóng)草資源的濫采亂挖，導(dǎo)致野生蟲(chóng)草資源越來(lái)越少，因此人工培養(yǎng)特定蟲(chóng)草子實(shí)體成為保護(hù)和利用這類生物資源的有效途徑。人工培育蟲(chóng)草子實(shí)體除了在蟲(chóng)草分類、遺傳育種等領(lǐng)域具有重要價(jià)值外，還可得到藥材和保健食品的原料，進(jìn)而分離其有效活性成分。長(zhǎng)座蟲(chóng)草是寄生于

2、同翅目蟬若蟲(chóng)上的一種重要的蟲(chóng)生真菌，其無(wú)性型為長(zhǎng)座被毛孢。目前關(guān)于長(zhǎng)座蟲(chóng)草及其無(wú)性型的研究報(bào)道很少。
　　 本文首先對(duì)長(zhǎng)座被毛孢的搖瓶工藝進(jìn)行了初步研究，結(jié)合本課題組的研究成果，人工大量培養(yǎng)長(zhǎng)座蟲(chóng)草子實(shí)體獲得成功，并對(duì)其中的清除自由基活性物質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。研究?jī)?nèi)容包括：試驗(yàn)菌株篩選、液體菌種培養(yǎng)基篩選優(yōu)化、搖瓶種子最佳培養(yǎng)時(shí)間確定、人工子實(shí)體的培養(yǎng)、清除自由基組分的分離純化、子實(shí)體提取物抗氧化模型的活性研究、三種萃取物的核苷和

3、麥角甾醇的定量測(cè)定和物質(zhì)類別鑒定，結(jié)果如下。
　　 采用平板培養(yǎng)方式對(duì)4株菌株進(jìn)行了篩選。結(jié)果表明：菌株RCEF3666在三種平板培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)均良好，菌落直徑大，培養(yǎng)14d菌落直徑最大，產(chǎn)孢能力也較好，且在預(yù)實(shí)驗(yàn)中該菌株也培養(yǎng)出子實(shí)體，因此選擇RCEF3666為進(jìn)一步研究的優(yōu)良菌株。
　　 對(duì)5種液體搖瓶培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明：菌株RCEF3666在液體培養(yǎng)基Ⅴ中培養(yǎng)15d后菌絲干重達(dá)到最高值，菌球大小均勻、發(fā)酵液色

4、澤純正，生長(zhǎng)最好，因此選用液體培養(yǎng)基Ⅴ為液體搖瓶培養(yǎng)基。
　　 在上述基礎(chǔ)上，對(duì)RCEF3666菌株的最佳搖瓶培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：種子液在培養(yǎng)5d左右開(kāi)始生長(zhǎng)，14d左右生長(zhǎng)速率達(dá)到最大，24d菌絲體干重達(dá)到最高，繼續(xù)培養(yǎng)菌絲體干重則差異不顯著，故選擇最大生長(zhǎng)速率時(shí)期的種子作為搖瓶種子，確定該液體搖瓶種子最佳培養(yǎng)時(shí)間為14d。
　　 將蟲(chóng)草子實(shí)體用80％乙醇，按8倍子實(shí)體質(zhì)量的溶劑量提取3次、每次2h，得到蟲(chóng)草

5、醇提物。將此提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到蟲(chóng)草萃取物。采用抗超氧自由基能力測(cè)試、抗DPPH自由基能力測(cè)試、測(cè)定Fe離子還原能力及對(duì)亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化體系中的抗氧化作用等4種方法，對(duì)蟲(chóng)草醇提物及不同溶劑萃取物抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，測(cè)試結(jié)果顯示正丁醇層具有較好的抗氧化能力。
　　 對(duì)長(zhǎng)座蟲(chóng)草子實(shí)體提取物各部位進(jìn)行可能含有的化學(xué)成分類型選擇各類成分特有的化學(xué)反應(yīng)，如顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、熒光性質(zhì)等作一般定性預(yù)試。選取14種不同

6、物質(zhì)類別鑒定方法對(duì)長(zhǎng)座蟲(chóng)草子實(shí)體提取物進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)石油醚層可能含有甾體或三萜、生物堿、內(nèi)酯，正丁醇層可能含有氨基酸、甾體或三萜、生物堿、內(nèi)酯，水層可能含有糖類或苷、生物堿、內(nèi)酯。
　　 通過(guò)HPLC法對(duì)活性部位進(jìn)行了核苷和麥角甾醇的定量測(cè)定。發(fā)現(xiàn)水層的核苷含量要顯著高于石油醚層和正丁醇層，而麥角甾醇的含量則是在石油醚層中含量最高。正丁醇層中既含有核苷又含有麥角甾醇。正丁醇層具有較高活性說(shuō)明其可能含有其他的活性成分，這需要進(jìn)行進(jìn)