1、目的：構(gòu)建千里光葉片組織全長cDNA文庫，并對該文庫進行隨機克隆測序及分析，部分基因進行生物信息學(xué)研究，以期了解千里光的功能基因組學(xué)信息，并為EST-SSRs(simple sequence repeats，簡單序列重復(fù))引物的開發(fā)及ESTs(expressed sequence tags，表達序列標簽)圖譜構(gòu)建提供基礎(chǔ)資料。
　　 方法：采用Trizol法提取千里光新鮮葉片組織中的總RNA，通過SMART(SwitchingM

2、echanism At5’end of RNA Transcript)技術(shù)構(gòu)建全長cDNA文庫；分析文庫滴度、庫容、重組率、全長率及冗余率，隨機選擇600個單克隆進行全長cDNA測序；利用NCBI的Blast進行核苷酸序列比對，SUmDNAMAN、Expasy Protparam、PROSITE、ProScale、CPHmodels-3.0、Swiss-model等軟件對目的蛋白進行生物信息學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　

3、(1)經(jīng)檢測原始文庫的庫容為4.3×106cfu，文庫滴度為1.3×106cfu/mL，插入片段大小平均1.5 kb，文庫重組率96.35％，冗余率10.88％，全長率為64.00％，滿足全長cDNA文庫質(zhì)量要求。
　　 (2)測序得到244條高質(zhì)量ESTs，含有244條獨立基因(unigenes)。Blast比對后得出133條序列沒有注解，80條序列與GenBank上公布的序列有較高同源性。
　　 測序得到的524條高

4、質(zhì)量cDNA序列中，含有467條unigenes，其中5條序列與千里光次生代謝產(chǎn)物的合成、運輸與代謝有關(guān)。
　　 (3)通過單克隆全長測序得到了千里光Hsp90-3(Heat shock proteins90-3，熱激蛋白90-3)的全長基因，采用生物學(xué)軟件對序列進行生物信息學(xué)分析和功能預(yù)測，結(jié)果表明，該基因編碼699個氨基酸的多肽，與擬南芥Hsp90-3(登錄號：NP_200412.1)的同源性最高，為93.71％；預(yù)測蛋白質(zhì)

5、的分子量為79.78 kDa，理論等電點為5.08。信號序列分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該蛋白主要定位于細胞的細胞核、過氧化物酶體、葉綠體類囊體膜及葉綠體基質(zhì)中。
　　 結(jié)論：(1)SMART技術(shù)能有效構(gòu)建高質(zhì)量全長cDNA文庫，該文庫可用于千里光功能基因組鑒定、新基因篩選及次生代謝產(chǎn)物生物合成的表達調(diào)控研究。
　　 (2)通過對得到的千里光的功能基因進行分析及預(yù)測，結(jié)果表明所獲得的千里光的功能基因多表現(xiàn)與千里光生理特征或合成相關(guān)的各