1、目的：
　　根據(jù)前期發(fā)現(xiàn)的大腸桿菌ATCC25922經(jīng)慶大霉素處理后表型的變化，結合轉錄組測序結果，篩選差異基因，探討大腸桿菌在體外經(jīng)亞抑制濃度的慶大霉素短期預處理后，運動性被抑制的分子機制。觀察細菌再次接觸慶大霉素后發(fā)生適應性耐藥的現(xiàn)象，構建yhjX基因的敲除株和互補株，以期揭示大腸桿菌對慶大霉素發(fā)生適應性耐藥的相關分子機制。
　　方法：
　?、盼⒘咳鉁♂尫y慶大霉素對大腸桿菌的最小抑菌濃度（MIC）。⑵1/2 M

2、IC、1/4 MIC和1/8 MIC慶大霉素對大腸桿菌預處理1小時后測生長曲線。⑶1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC慶大霉素對大腸桿菌預處理1小時后在半固體培養(yǎng)基上測定其游動運動和涌動運動。⑷轉錄組測序比較表達水平的差異，用Real-time PCR對基因sdhA、sdhB、sdhC、sdhD、motA、motB、filF、fliG、fliM、fliN、yhjX進行驗證。⑸ELISA試劑盒測大腸桿菌菌體內琥珀酸脫氫酶的濃度。

3、⑹酶標儀法測大腸桿菌菌體內延胡索酸的濃度。⑺在涌動瓊脂平板里各添加0.9 mM、1.8 mM、3.6 mM的延胡索酸溶液和1 mM、2 mM、4 mM的丙二酸溶液，經(jīng)亞抑制濃度的慶大霉素對大腸桿菌預處理1小時后測涌動運動。⑻微量肉湯稀釋法測慶大霉素對大腸桿菌的野生菌株、敲除菌株和互補菌株的MIC。⑼大腸桿菌的野生菌株、敲除菌株和互補菌株在含1 MIC和1/2 MIC慶大霉素的MH肉湯里測生長曲線。⑽經(jīng)亞抑制濃度的慶大霉素誘導大腸桿菌的野

4、生菌株、敲除菌株和互補菌株1小時后，再接觸1 MIC和1/2 MIC慶大霉素，測生長曲線和平板菌落計數(shù)。
　　結果：
　?、俅竽c桿菌的MIC為2μg/ml。②大腸桿菌在1/2 MIC慶大霉素與無慶大霉素預處理后生長曲線基本一致。③與對照組相比，1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC慶大霉素預處理能夠顯著抑制大腸桿菌的涌動運動，且慶大霉素的濃度越大抑制作用越大。然而慶大霉素對大腸桿菌的游動運動無明顯作用。④與對照組相比

5、，測序結果顯示處理組基因sdhA、sdhB、sdhC、sdhD、motA、motB、fliG的表達水平下調了，filF、fliM、fliN、yhjX的表達水平上調了。除了基因fliG，其余驗證結果與轉錄組測序結果基本一致。⑤處理組的琥珀酸脫氫酶濃度比對照組顯著下降。⑥處理組的延胡索酸濃度比對照組顯著下降。⑦延胡索酸可以逆轉由慶大霉素引起抑制的涌動運動，且延胡索酸的濃度越高逆轉的程度越大。而丙二酸可以加強由慶大霉素引起的涌動運動抑制作用。

6、⑧大腸桿菌的的野生菌株、敲除菌株和互補菌株的MIC均為2μg/ml。⑨在1/2 MIC慶大霉素中，敲除菌株明顯比野生菌株和互補菌株的生長情況好。⑩在1/2 MIC慶大霉素中，野生和互補菌株會出現(xiàn)適應性耐藥，而敲除菌株不會出現(xiàn)適應性耐藥。
　　結論：
　?、艁喴种茲舛鹊膽c大霉素預處理可抑制大腸桿菌的涌動運動，該作用可以認為是慶大霉素的特殊抗生素后效應之一。這種抑制作用是由琥珀酸脫氫酶sdh基因表達水平下調，繼而使大腸桿菌延胡索