1、芥子氣（簡稱SM）即二氯二乙基硫醚，是一種典型的糜爛性化學戰(zhàn)劑，被禁止化學武器組織（OPCW）嚴格控制和禁用。由于其制備簡單，使用門檻低，難防難治，極易用于戰(zhàn)爭、恐怖襲擊等，對人民的健康安全造成了極大地威脅。SM暴露生物體后，具有廣泛的毒性，中毒損傷機制復雜，其具體的毒理作用機制至今還未闡明。目前普遍認為DN A烷基化損傷及斷裂是其生物毒性最直接、最重要的始發(fā)機制。因此，DNA加合物成為SM中毒后最重要的內暴露指標，是國內外研究SM中毒

2、后體內損傷機制的熱點。
　　課題組前期研究結果表明，SM暴露后在體內迅速發(fā)生氧化反應，其中大部分（約90％）轉化為芥子亞砜（SMO），SMO會逐步氧化成芥子砜（SMO2）， SMO2可進一步轉化為的二乙烯砜（DVS）。已有報道，DVS屬劇毒分子，其毒性高于SM，并且具有類SM的糜爛性和高反應活性。但目前圍繞其開展的毒理研究工作較少，有關DVS的DN A損傷效應研究更是尚未見有文獻報道。
　　本文以SM的重要氧化代謝產物DVS

3、為研究對象，詳細研究其與體內重要活性分子，包括谷胱甘肽（GSH）、嘌呤、核苷和 DNA等形成加合物的特性和能力，闡述DVS對機體造成氧化損傷和基因損傷的分子基礎，進而揭示其對SM系列損傷效應的貢獻，回答SM代謝產物是否具有二次損傷效應的疑問，為溯源芥子氣中毒和開展醫(yī)學干預提供新思路。
　　主要研究內容如下：首先設計和優(yōu)化合成路線，制備系列新加合物；進而采用 HPLC-MS/MS、NMR等技術對其結構進行了鑒定，在此基礎上建立有效的

4、LC-MS/MS方法，詳細考察 DVS及其二相代謝產物形成的 DNA加合物在動物體內各組織的分布情況及時效關系，為更準確闡述SM中毒損傷機制提供重要理論依據(jù)。
　　第一章為前言。詳細介紹了SM的相關理化性質及其在體內包括氧化水解途徑、結合途徑在內的多種代謝途徑。重點闡述了SM在體內的氧化代謝途徑及重要代謝產物DVS的來源及其毒性和損傷機制，明確DVS的毒性高于SM且能誘導產生基因毒性，圍繞DVS提出研究目標和研究內容。
　　

5、第二章是參考品制備和鑒定。以SM為起始原料，經過兩次“串聯(lián)氧化”反應和一步“脫氯”反應，方便高效的獲得了 DVS。在此基礎上，通過優(yōu)化反應底物，簡化分離純化條件，首次制備了5種新的 DVS-嘌呤加合物和2種GSH-DVS-嘌呤加合物。并采用 HPLC-MS/MS、NMR、HPLC、GC-MS等技術對加合物進行結構確證及純度分析。
　　第三章為體外D VS反應特性考察及D VS-DN A加合物檢測方法建立。在體外溶液中重點考察了DV

6、S與嘌呤堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤）、脫氧核苷（腺苷、鳥苷）、DN A在近生理條件下形成加合物的特性及機理，進而建立有效的DVS-DN A加合物的LC-MS/MS檢測方法，完成染毒HaCaT細胞內的DNA加合物的檢測。檢測結果顯示，水體系中DVS能與DNA形成五種加合物，具體是N3-HESVA， N7-HESVG，N3-AHESEHG-N7，N7-GHESEHG-N7，N3-AHESEHA-N3。而染毒細胞內僅檢測到四種DNA加合物并非五種，

7、未檢測到N3-AHESEHA-N3，從而確證了DVS對DN A存在損傷效應。
　　第四章是D VS染毒動物體內D VS-DN A加合物的確證及組織分布研究。建立了DV S靜脈染毒S D大鼠模型，在暴露后不同時間點采集重點臟器組織，如肝、脾、肺、腎、腦等，定量檢測D VS-DN A加合物的含量分布，考察D VS損傷水平及毒性特點。結果表明，染毒動物實驗結果與細胞實驗一致，僅檢測到四種DNA加合物。相比于SM，DVS形成加合物的種類和

8、豐度存在顯著差異，對臟器的持續(xù)損傷能力更強，部分DN A加合物可在體內存在數(shù)天，組織分布不顯著。
　　第五章進一步研究了DV S二相代謝產物DVS-GS H與DN A加合反應特性。重點考察了DVS與GSH、DVS-GSH與DNA在近生理條件下體外的反應加合情況，結果表明在水溶液中 DVS與 GSH的反應活性顯著高于 SM，且生成的DVS-GSH單加合物也具有較高的反應活性，可與 DNA的腺嘌呤和鳥嘌呤生成系列新的加合物（GSH-D

9、VS-Ade、GSH-DVS-Gua），且前者加合物的豐度比高于后者，因此DVS的二相代謝產物DVS-GS H對DN A的損傷效應也值得關注。
　　綜上所述，本論文完成SM氧化代謝物DVS系列 DNA加合物參考品的制備，建立了 DVS-DNA加合物的 LC-MS/MS方法，完成染毒細胞內 DVS-DNA加合物的鑒定及染毒動物體內DVS-DN A加合物的組織分布研究，并初步探討了DVS的二相代謝產物（DVS-GSH）對DNA的損傷效