1、目的：
　　嗅上皮神經干細胞作為神經來源的成體干細胞在神經損傷的修復中具有獨特的優(yōu)越性，課題組前期實驗發(fā)現嗅上皮神經干細胞植入噪聲性耳聾大鼠耳蝸內，可一定程度提高大鼠的聽力，并發(fā)現移植細胞定向遷移至螺旋神經節(jié)。大量研究報道了，體內外有多種因子參與細胞的遷移過程。有報道稱噪聲性損傷內耳可檢測到IL-1β、TNF-α的增高。IL-1β作為常見的炎癥因子，參與多種細胞中的遷移、侵襲等生物學行為，如胃癌細胞、朗漢斯細胞、骨髓間充質干細胞等

2、，IL-1β是否可以誘導嗅上皮神經干細胞的遷移尚未見相關報道。
　　干細胞遷移至組織損傷部位是修復的前提，細胞遷移涉及到細胞外基質的水解、結構重塑等一系列生物學過程，然而基質金屬蛋白酶(MMPs)在多種細胞的遷移、侵襲的過程中發(fā)揮重要作用。關于MMPs的報道雖多見于腫瘤細胞，但在骨髓間充質干細胞、人臍帶間充質干細胞等干細胞中也有報道稱MMPs上調與這些細胞的遷移有關。我們前期實驗也證實MMPs在嗅上皮神經干細胞亦有表達，因此，我們

3、推測IL-1β可誘導嗅上皮神經干細胞定向遷移至螺旋神經節(jié)的現象，MMPs可能參與遷移過程，對其遷移的機制進一步研究。
　　方法：
　　1.體外原代培養(yǎng)嗅上皮神經干細胞，分別予以0n/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml IL-1β處理嗅上皮神經干細胞，分別通過transwell實驗、CCK-8實驗、AnnexinⅤ/PI染色檢測細胞的遷移、增殖和凋亡，選擇明顯改變遷移能力，同時對細胞增殖、凋亡

4、無明顯影響的濃度用于后續(xù)實驗;
　　2.將細胞分為空白對照、IL-1β處理組，分別通過western blot、rt-PCR檢測MMP-2、MMP-9在蛋白、基因水平表達情況;通過siRNA轉染的方法干擾MMP-2和MMP-9的表達，檢測相應細胞遷移變化情況;
　　3.篩選MMPs常見上游通路，選擇IL-1β明顯激活的通路;用有效通路抑制劑阻斷相關通路，實驗分為空白對照組、IL-1β+通路阻滯劑組、IL-1β處理組，分別通過

5、western blot、rt-PCR檢測MMP-2、MMP-9在蛋白、基因水平表達情況;tranwell實驗檢測阻斷通路后細胞遷移變化情況。
　　結果：
　　1.本課題檢測了IL-1β與嗅上皮神經干細胞遷移的關系，發(fā)現IL-1β可以誘導促進嗅上皮神經干細胞遷移，且隨著IL-1β濃度的升高，細胞遷移能力遞增;
　　2.IL-1β可以上調嗅上皮神經干細胞MMP-2、MMP-9的表達，通過siRNA干擾MMP的表達后發(fā)現，

6、細胞遷移能力明顯下降;
　　3.IL-1β誘導嗅上皮神經干細胞同時檢測MMP上游常見信號通路，發(fā)現NF-κB、JNK通路磷酸化明顯升高。阻斷這兩條通路后，MMP-2、MMP-9表達明顯下調，同時細胞遷移能力下降。阻斷NF-κB后，MMP表達及細胞遷移能力與空白對照組無差異，無統(tǒng)計學意義;而阻斷JNK后，MMP表達及細胞遷移能力與空白組相比仍有一定程度上升高，具有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.IL-1β濃度在0-80