1、研究目的:研究SDF-1α/CXCR4配體/受體軸在神經干細胞遷移過程中的調節(jié)作用。 研究方法: 1. 胎鼠神經干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及CXCR4表達：采用機械分離、無血清選擇性連續(xù)傳代培養(yǎng)法從孕14天GFP轉基因大鼠胚胎大腦皮層中獲取神經干細胞；通過細胞貼壁生長、熒光免疫細胞化學染色的方法檢測其神經干細胞特異性標志物Nestin蛋白及基質細胞衍生因子-1α特異性受體CXCR4的表達情況，并使用流式細胞術檢測神經干細胞

2、純度及CXCR4與Nestin的共表達率。 2. SDF-1α影響神經干細胞遷移的體外研究：在Blind-Well小室的下室中加入不同濃度SDF-1α，上室中加入神經干細胞單細胞懸液（細胞總量為5×104），培養(yǎng)箱中孵育8h后觀察不同濃度SDF-1α對遷移至濾膜下表面NSCs數量的影響；將CXCR4受體激動劑Diprotin A預混入下室中含一定濃度SDF-1α的干細胞分化培養(yǎng)液或上室中換用CXCR4受體阻斷劑預處理的單細胞懸液

3、，孵育8h后觀察遷移至濾膜下表面細胞數量的變化。將干細胞克隆球接種于μ-Slide的細胞生長通道內，待細胞球牢固貼附后建立跨越細胞生長通道的0ng/ml～500ng/ml SDF-1α濃度梯度，并同時設立空白對照組和500ng/ml Balance-SDF-1α組（只提高細胞生長環(huán)境中SDF-1α的濃度，而不形成濃度梯度），培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育8h后觀察由單個神經干細胞克隆球遷出的細胞在SDF-1α濃度梯度作用下的分布特點；將單個干細胞克隆

4、球作為所在組的一個樣本，以干細胞克隆球的中心為圓點，以SDF-1α低濃度一側遷出細胞所在位置距圓點的最近距離為半徑R擬合一個圓形，同時測量SDF-1α高濃度一側遷出細胞所在位置距圓點的最遠距離D，計算該例樣本的趨化遷移指數（chemotaxis migration index，CMI），即(D-R)/R，以之作為評估神經干細胞定向遷移程度的指標并用于后續(xù)的統(tǒng)計學分析。 研究結果： 1. 胎鼠神經干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及

5、CXCR4表達：采用無血清選擇性連續(xù)傳代培養(yǎng)法可以從大鼠胚胎大腦皮層中獲取神經干細胞，在體外培養(yǎng)條件下能夠不斷增殖，并具有分化為神經元和膠質細胞的潛能；熒光免疫細胞化學染色的方法證實我們培養(yǎng)的神經干細胞能夠表達特異性標志物Nestin蛋白和SDF-1α的特異性受體CXCR4；流式細胞術檢測結果顯示，傳3代后細胞的Nestin陽性率達到90.47％～98.16％，CXCR4與Nestin的共表達率為78.99％。 2. SDF-1

6、α影響神經干細胞遷移的體外研究：Blind-Well小室細胞趨化實驗中，除1ng/ml SDF-1α組之外的其他各濃度組（10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml）與空白對照組（0ng/ml）之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；500ng/ml SDF-1α組的細胞遷移數量高于其他各濃度組，與除1000ng/ml SDF-1α組之外的其他各濃度組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；C

7、XCR4受體激動劑Diprotin A和受體阻斷劑AMD3100分別能夠增加和減少100ng/ml SDF-1α組的細胞遷移數量。Μ-Slide細胞遷移實驗中，在SDF-1α濃度梯度作用下，由細胞克隆球遷出的細胞呈不對稱分布，通常有更多的遷出細胞分布于趨化因子濃度較高的一側，且該側細胞的最大遷移距離往往也比對側遠；以趨化遷移指數（CMI）作為評估神經干細胞定向遷移程度的指標，500ng/ml SDF-1α濃度梯度組CMI與空白對照組（0

8、ng/ml）和500ng/ml Balance-SDF-1α組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 研究結論： 1. 采用機械分離、無血清選擇性連續(xù)傳代培養(yǎng)法能夠從GFP轉基因大鼠胚胎大腦皮層中獲得純度較高且具有多向分化潛能的神經干細胞；SDF-1α的特異性受體CXCR4在胎鼠腦組織來源的神經干細胞上有表達，其表達率接近80％。 2. SDF-1α與其特異性受體CXCR4相互作用，能夠對神經干細胞的定向遷移產