1、研究目的：
　　癌癥類型中，肺癌是發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一，約有30％～40％的中晚期肺癌病人會(huì)發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重危害人類的健康和生活質(zhì)量。黑色素瘤特異性抗原(Preferentially expressed antigen of melanoma，PRAME)是于眾多黑色素瘤病人群體中篩查得出，它是一種表面抗原，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞可以識(shí)別PRAME，隨即引發(fā)特異腫瘤的相關(guān)性溶解。目前，國(guó)內(nèi)外研究已確定PRAME可以作為一個(gè)判斷

2、該腫瘤患者預(yù)后及復(fù)發(fā)情況的重要指標(biāo)，PRAME在原發(fā)性骨肉瘤，皮膚鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤中的表達(dá)高低也預(yù)示著腫瘤的演出轉(zhuǎn)移情況。為了闡明PRAME在肺癌骨轉(zhuǎn)移及其對(duì)下游基因信號(hào)通路調(diào)控的作用機(jī)制，設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)研究。
　　研究方法:
　　1.檢測(cè)正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及骨轉(zhuǎn)移腫瘤標(biāo)本中PRAME表達(dá)水平獲取正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及肺癌骨轉(zhuǎn)移腫瘤組織，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印記檢測(cè)蛋白電泳及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等檢測(cè)明確PRAME，

3、E-cadherin在表達(dá)水平上的差異及意義。
　　2.檢測(cè)PRAME對(duì)肺癌細(xì)胞系遷移及侵襲能力的影響體外驗(yàn)證PRAME基因在肺癌骨轉(zhuǎn)移中的影響，建立穩(wěn)定敲除PRAME的肺癌骨轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系PC9及A549，利用MTT，侵襲實(shí)驗(yàn)等技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞遷移和增殖能力及PRAME對(duì)E-cadherin蛋白水平和RNA水平的影響。
　　3.小鼠骨腫瘤模型中PRAME表達(dá)水平對(duì)肺癌骨轉(zhuǎn)移的影響骨內(nèi)局部注射法利用上述PC9細(xì)胞系建立小鼠脛骨

4、肺癌骨轉(zhuǎn)移模型，通過(guò)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，蛋白質(zhì)免疫印記檢測(cè)，免疫組化等方法檢測(cè)PRAME基因的表達(dá)與E-cadherin蛋白水平的關(guān)系，通過(guò)X-Ray，熒光標(biāo)記活體成像等方法對(duì)小鼠腫瘤模型進(jìn)行評(píng)估。
　　研究結(jié)果:
　　1.檢測(cè)正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及骨轉(zhuǎn)移腫瘤標(biāo)本中PRAME表達(dá)水平蛋白質(zhì)免疫印記檢測(cè)及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的結(jié)果證實(shí)正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及肺癌骨轉(zhuǎn)移腫瘤組織中PRAME及E-cadherin均

5、有表達(dá)，其中正常人肺組織中的表達(dá)水平最高，骨轉(zhuǎn)移組織最低。
　　2.檢測(cè)PRAME對(duì)肺癌細(xì)胞系遷移及侵襲能力的影響體外實(shí)驗(yàn)中，抑制PC9及A549的PRAME基因的表達(dá)，細(xì)胞遷移及增值活性上均明顯低于對(duì)照組細(xì)胞系，同時(shí)E-cadherin蛋白表達(dá)水平與PRAME基因呈正相關(guān)。
　　3.小鼠骨腫瘤模型中PRAME表達(dá)水平對(duì)肺癌骨轉(zhuǎn)移的影響通過(guò)X-Ray照射發(fā)現(xiàn)抑制PRAME基因組的骨侵蝕的現(xiàn)象明顯強(qiáng)于對(duì)照組，熒光標(biāo)記活體成像結(jié)