1、本研究對從東北地區(qū)自行采集的菌株進行了分離、純化、培育，并進行了相關的分子生物學技術鑒定和相關酶活力變化規(guī)律的研究。利用自行研制的智控益生菌液體發(fā)酵器和智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機對菌株進行了液體發(fā)酵與固體生態(tài)培養(yǎng)及干燥一體化研究，探尋了其相關指標動態(tài)變化規(guī)律，測試智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機的運行效果，為其工廠規(guī)?；a應用提供了必要的技術參考，具有較好的理論應用價值。研究結果如下:
　　(1)對自行采集分離純化的M-01菌株進

2、行了形態(tài)學研究和生理生化測定，并采用16SrDNA測序以及gyrA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹分析技術對菌株進行了分子生物學鑒定，鑒定結果:M-01菌株為解淀粉芽孢桿菌(M-01，Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，屬于好氧菌。
　　(2)在18℃、pH7.2條件下，對M-01菌株進行分泌淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶酶活力動態(tài)變化規(guī)律的研究，結果表明:M-01菌淀粉酶活力68h時，達到較高水平1

3、3.02U/dL;蛋白酶活力在56h后趨于穩(wěn)定，至74h時為8.04U/dL;脂肪酶活力在56h時達到峰值，為1.159U/L。
　　(3)利用自行研制的智控益生菌液體發(fā)酵器對M-01菌進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，在適宜的液體發(fā)酵營養(yǎng)底物組成和接種量條件下，合理有效控制發(fā)酵液溫度35±0.2℃，初始pH值7.2±0.1以及氣體攪拌方式等發(fā)酵條件，結果表明:M-01菌經(jīng)24h液體發(fā)酵，活菌數(shù)為146.675±4.05×108CFU/mL，芽孢

4、率為91.76±1.50％;在整個發(fā)酵過程中，發(fā)酵液pH值呈下降趨勢，發(fā)酵液中還原糖含量呈下降趨勢，至24h時，還原糖含量為5.857±0.314mg/mL;在發(fā)酵前期0-4h，發(fā)酵液中氨基氮含量增高，4-24h期間，發(fā)酵液中氨基氮含量逐漸降低，與此同時，在整個發(fā)酵過程中微生物總蛋白(MCP)含量呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢。
　　(4)通過L9(33)正交試驗設計，研究培養(yǎng)溫度、菌料濕度、作用時間3因素對固體生態(tài)培養(yǎng)28h后的M-01菌芽孢

5、形成率的影響，結果表明:各因素對M-01菌芽孢形成率影響的主次順序為:培養(yǎng)溫度＞菌料濕度＞培養(yǎng)時間。故在M-01菌固體發(fā)酵培養(yǎng)28h后，促進芽孢率形成的影響因素的最佳組合為A1B3C2，即培養(yǎng)溫度45℃，菌料濕度55％，培養(yǎng)時間2h。
　　(5)采用自行研制的智控固體生態(tài)培養(yǎng).干燥一體機對M-01菌進行固體生態(tài)培養(yǎng)及溫敏干燥效果的研究，自動控制發(fā)酵溫度35℃±1.0℃，菌料濕度55％±5％，并調節(jié)菌料初始pH7.2±0.1，根據(jù)正

6、交設計結果，采用分階段固體發(fā)酵培養(yǎng)，第一階段0-28h固體培養(yǎng)，控制發(fā)酵溫度35℃±1.0℃，菌料濕度55％±5％，發(fā)酵培養(yǎng)28h，以獲得較高的活菌數(shù);第二階段28-30h固體培養(yǎng)，提高發(fā)酵溫度至45℃，維持培養(yǎng)2h，以刺激芽孢的形成，以獲得較高芽孢數(shù)。結果表明:至30h時，菌質中活菌數(shù)為224.25±4.47×108CFU/g，芽孢數(shù)為203.63±4.51×108CFU/g，芽孢形成率為90.8±0.73％。在自行研制的智控固體生態(tài)