1、目的：
　　觀察不同濃度染料木素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1作用及其抑癌基因表達(dá)的的研究，從而為臨床治療胰腺癌提供新的思路方法。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)共分實(shí)驗(yàn)組（80，120，160，200μmol/L）的染料木素、空白對(duì)照組（PBS）和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照(吉西他濱)。各組培養(yǎng)基處理細(xì)胞12h、24h、36h、48h、60h后，細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）法檢測(cè)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1在染料木素作用下的增殖活性；流式細(xì)胞術(shù)檢

2、測(cè)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1在染料木素木素作用下的凋亡細(xì)胞百分率；用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)（RT-PCR）方法測(cè)定P53及P21抑癌基因的表達(dá)；Western blot法檢測(cè)抑癌基因P53和P21的蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:細(xì)胞凋亡與細(xì)胞基因mRNA采用的是LSD法，細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)采用的是配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意思。
　　結(jié)果：
　　1.CCK-8法檢測(cè)染料木素對(duì)胰腺癌細(xì)胞（PANC-1）的生長(zhǎng)抑制作用

3、
　　分別對(duì)160μmol/L與200μmol/L、120μmol/L與200μmol/L、160μmol/L與GEM組、200μmol/L與GEM組通過(guò)SPSS13.0進(jìn)行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示160μmol/L對(duì)GEM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.067)，而其余三組P值均小于0.05；針對(duì)36h以內(nèi)的數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)120μmol/L對(duì)GEM組P值亦小于0.05，而200μmol/L與GEM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.051)。根據(jù)以

4、上結(jié)果，我們認(rèn)為染料木素總體呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性，其中36h內(nèi)200μmol/L效果與GEM組較為接近，但160μmol/L總體效果最好，且與GEM組最為接近。
　　2.流式細(xì)胞儀（FCM）各組凋亡指數(shù)比較
　　FCM結(jié)果可以看出，4個(gè)染料木素分組中，80μmol/L對(duì)細(xì)胞增殖抑制效果并不明顯，而120μmol/L和160μmol/L最接近GEM組的效果，200μmol/L晚期凋亡細(xì)胞占大部分。可見(jiàn)染料木素的作用有明顯的

5、濃度依賴性。
　　3.Western bloting檢測(cè)P53、P21等相關(guān)蛋白表達(dá)
　　Western-blot檢測(cè)蛋白水平顯示160μmol/L和200μmol/L染料木素相對(duì)于空白對(duì)照能夠明顯的增強(qiáng)抑癌基因P21和P53的蛋白水平的表達(dá)，相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)組沒(méi)有明顯的差異。
　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)FCM和CCK-8法表明染料木素作用具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性，但是在低濃度時(shí)，染料木素的作用并不理想，而當(dāng)濃度達(dá)到1

6、60μmol/L以上時(shí)其FCM結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組吉西他濱非常接近，濃度達(dá)到200μmol/L時(shí)晚期凋亡細(xì)胞已占60％以上
　　2.CCK-8法細(xì)胞增殖的結(jié)果顯示160μmol/L的抑制效果在48h達(dá)到最佳，整體效果最好且曲線與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照相近，而Western-blot結(jié)果顯示染料木素對(duì)P21、P53蛋白均有明顯上調(diào)作用，濃度依賴性小。
　　3.我們推斷濃度為160μmol/L染料木素對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的抑制作用最佳，其可