1、研究目的:
　　本實(shí)驗(yàn)探討miR-3195在人喉癌Hep-2細(xì)胞中的增殖作用及機(jī)制，通過構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)miR-3195的喉癌Hep-2細(xì)胞株，觀察miR-3195高表達(dá)后對(duì)人喉癌細(xì)胞株Hep-2裸鼠移植瘤增殖能力的影響，了解喉癌中miR-3195的生物學(xué)功能,通過生物信息學(xué)分析miR-3195可能調(diào)控的靶基因,初步分析其分子機(jī)制。
　　方法:
　　1、應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)觀察miR-3195過表達(dá)后對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖能

2、力的影響。
　　2、建立裸鼠移植瘤模型裸鼠皮下注入miR-31955.7倍/Hep-2, pshRNA-miR/Hep-2和Hep-2三組細(xì)胞建立人喉癌異種移植瘤模型，監(jiān)測(cè)三種不同細(xì)胞接種后裸鼠移植瘤的腫瘤形成及腫瘤生長(zhǎng)情況。
　　3、生物信息學(xué)分析對(duì) miR-3195可能的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)。
　　4、 Western blot驗(yàn)證miR-3195與其靶基因在喉癌細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、通過M

3、TT比色法分析顯示，以Hep-2組，pshRNA-miR/Hep-2及miR-31955.7倍/Hep-2細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察miR-3195高表達(dá)后對(duì)喉癌Hep-2增殖能力的影響，其結(jié)果表明，miR-31955.7倍/Hep-2組細(xì)胞增殖落后Hep-2組和 pshRNA-miR/Hep-2組，表明miR-3195高表達(dá)后抑制Hep-2細(xì)胞的增殖。
　　2、三組細(xì)胞皮下接種后在裸鼠體內(nèi)均成瘤，接種pshRNA-miR/Hep-2細(xì)

4、胞和Hep-2細(xì)胞組移植瘤較接種miR-31955.7倍/Hep-2細(xì)胞組移植瘤生長(zhǎng)快。接種后30天處死裸鼠，pshRNA-miR/Hep-2細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞組移植瘤重量明顯高于miR-31955.7倍/Hep-2細(xì)胞組。
　　3、靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)miR-31953’UTR特異性靶基因，發(fā)現(xiàn)有4個(gè)與腫瘤相關(guān)，其中預(yù)測(cè)結(jié)果顯示：miR-3195與ST3GAL23’UTR有2個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，miR-3195與TBX13’UTR有1個(gè)

5、結(jié)合位點(diǎn)。
　　4、Western blot蛋白印記法檢測(cè)miR-3195與其靶基因ST3GAL2、TBX1在喉癌細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系：結(jié)果表明：miR-31955.7倍/Hep-2組較pshRNA-miR/Hep-2細(xì)胞和Hep-2組TBX1蛋白表達(dá)量明顯下降，而ST3GAL2則下降不明顯，提示miR-3195抑制喉癌的增殖可能與抑制TBX1基因表達(dá)有關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-3195高表達(dá)后可以抑制喉癌Hep-