1、鄭州大學博士學位論文RNAi技術(shù)干擾Survivin基因?qū)戆〩ep2細胞作用的實驗研究姓名：劉善廷申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉頭頸外科指導教師：婁衛(wèi)華20070510‘，‘!￡；鄭州大學2007年博l：研究生論文中文摘要傳統(tǒng)腫瘤基因治療的轉(zhuǎn)染效率低、靶向性差、抗癌基因表達量低的缺點。為解決以上缺點，近年來RNAi干擾技術(shù)被應(yīng)用于惡性腫瘤基因治療的試驗研究。其原理是小片段RNA(siRNA)利用堿基互補的原理，特異性地結(jié)合癌基因的m

2、RNA，干擾其翻譯、轉(zhuǎn)錄形成蛋白質(zhì)的功能，阻抑癌蛋白的生成。使癌細胞向成熟方向分化或誘導細胞凋亡，從而達到抑制腫瘤細胞增殖的目的。RNAi技術(shù)是在核酸水平改變腫瘤操控基因的治療方法，特異性強屆4作用小，有希望成為新的基因治療途徑。Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的tAP家族成員之一，是目前發(fā)現(xiàn)的抗凋亡能力最強的凋亡抑制因子，具有不同于IAP家族其他成員的獨特性質(zhì)和結(jié)構(gòu)，在正常成人組織中不表達而選擇性地表達于惡性腫瘤組織，且與腫瘤細胞的分化增殖

3、及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這種獨特的表達特性及其與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的密切關(guān)系，使其成為惡性腫瘤診斷與治療的新靶點?；谝韵履康模?探討survivin基因在喉癌組織中的表達及其與喉癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系；2觀察利用RNAi技術(shù)敲除喉癌細胞中survivin基因?qū)戆┘毎蛲龅挠绊懀?RNAi技術(shù)作用于活體喉癌細胞的效果；4RNAi技術(shù)應(yīng)用于活體的安全性。本研究用免疫組織化學方法檢測喉鱗癌標本中survivin及其它凋亡相關(guān)基因的表達及其和

4、喉癌l|缶床特點的關(guān)系，探討它們在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用。建立以survivin基因為目的基因，質(zhì)粒為載體的siRNA，脂質(zhì)體包埋，轉(zhuǎn)染喉癌Hep2細胞，觀察轉(zhuǎn)染后細胞的生長情況、survivin的表達和細胞凋亡。建立Hep2細胞裸鼠模型，靜脈途徑給藥，觀察瘤體增長情況，瘤細胞內(nèi)survivin的表達和細胞凋亡。方法1采用免疫組化檢測人喉鱗癌細胞中survivin，caspase3，bcl2，bax，p53基因的表達。2采用細胞免疫化