在食管癌ECA109細(xì)胞中p107-Survivin結(jié)合對(duì)靶基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：探討p107與轉(zhuǎn)錄因子Survivin在食管癌ECA109細(xì)胞中是否存在結(jié)合現(xiàn)象及相互作用，并觀察p107與Survivin的結(jié)合現(xiàn)象對(duì)IKKβ的表達(dá)是否具有調(diào)控作用。
　　方法：構(gòu)建CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin和CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin載體，用Western-blot方法檢測(cè)其在食管癌ECA109細(xì)胞中表達(dá)情況。采用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)p10

2、7蛋白與Survivin蛋白是否存在結(jié)合現(xiàn)象，采用細(xì)胞核定位實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p107蛋白與Survivin蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，最后采用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測(cè)這種結(jié)合現(xiàn)象對(duì)IKKβ啟動(dòng)子活性的調(diào)控。
　　結(jié)果：Western-blot結(jié)果顯示在食管癌ECA109細(xì)胞中轉(zhuǎn)染CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin和C MV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin質(zhì)粒后，在大小約19.0kD

3、的位置檢測(cè)出含F(xiàn)lag標(biāo)簽的Survivin蛋白以及16.5kD的位置檢測(cè)出內(nèi)源性的Survivin蛋白，大約110.0k D的位置檢測(cè)出含F(xiàn)lag標(biāo)簽的p107蛋白表達(dá)。免疫共沉淀結(jié)果顯示p107蛋白與Su rvivin蛋白在食管癌ECA109細(xì)胞中具有結(jié)合現(xiàn)象。細(xì)胞核定位實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出p107蛋白與Survivin蛋白在食管癌ECA109細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)的定位。熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測(cè)p107蛋白和Survivin蛋白的結(jié)合現(xiàn)象及相互作用

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