1、目的：
　　進一步確證有機錫化合物二-(4-氯苯甲酰異羥肟酸)二正丁基合錫（DBDCT）對細胞色素P4503A（CYP3A）抑制作用機制。本文研究DBDCT對孕烷X受體（PXR）介導CYP3A表達的影響，分析PXR是否參與DBDCT對CYP3A的抑制過程，考察DBDCT是否可以引起核因子κB（NF-κB）的活化，以及NF-κB對PXR介導CYP3A表達途徑的影響，探討DBDCT是否可以通過活化NF-κB抑制PXR介導的CYP3A轉

2、錄表達過程。
　　方法：
　　（1）利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，研究DBDCT對PXR介導的CYP3A轉錄表達的影響；（2）采用Western blot方法分別對DBDCT作用前后的HepG2細胞全蛋白、胞漿蛋白、胞核蛋白進行檢測，分析DBDCT作用前后NF-κB總量的變化及其在胞漿、胞核中表達量變化情況；同時，采用免疫熒光法研究DBDCT作用前后NF-κB由胞漿轉運至細胞核內(nèi)的情況，以研究NF-κB是否可以被DBDCT激活

3、；（3）采用熒光定量PCR（FQ-PCR）方法和雙熒光素報告酶實驗，研究DBDCT激活的NF-κB對DBDCT作用后PXR介導的CYP3A轉錄調(diào)節(jié)途徑的影響；（4）利用RNA干擾技術分別干擾PXR和NF-κB的表達，采用FQ-PCR方法檢測DBDCT對HepG2細胞中CYP3A mRNA表達水平的影響，驗證DBDCT對CYP3A的抑制過程與PXR和NF-κB的關系，進一步明確抑制作用的機制。
　　結果：
　　（1）DBDCT

4、可以誘導人或大鼠PXR介導的CYP3A基因轉錄表達，且呈量效關系，與空白對照組相比，0.5μM、1μM和2μM的DBDCT作用24h可以通過rPXR誘導CYP3A1表達升高至1.37、2.06和4.34倍（p<0.05、p<0.001、p<0.001），以這三種濃度的DBDCT作用24h后hPXR介導的CYP3A4表達升高至2.16、3.72及4.86倍（p<0.05、p<0.001、p<0.001）；同時該誘導作用也存在良好的時效關系

5、，以0.5μM的DBDCT分別作用24h、48h、72h，結果顯示作用時間越長對PXR介導CYP3A表達的誘導作用越強。（2）Western blot法測得DBDCT作用前后細胞全蛋白中NF-κB的表達量未見顯著性變化（p>0.05），但與空白對照組相比1μM和2μM的DBDCT可使細胞胞漿中NF-κB的表達量下降至0.70和0.61倍（p<0.01、p<0.01），使細胞核內(nèi)NF-κB的表達量增至1.31和2.00倍（p<0.01、p

6、<0.01）。免疫熒光法也證明DBDCT作用后NF-κB由胞漿轉運至胞核，提示DBDCT可以活化NF-κB。（3）NF-κB的激活劑LPS可以使CYP3A4的mRNA表達水平明顯下降；DBDCT也可以使CYP3A4的mRNA表達水平降低，且該作用可以由NF-κB抑制劑PDTC逆轉。此外，在雙熒光素報告酶實驗中，向轉染后的細胞中加入DBDCT可誘導CYP3A4表達升高，共轉染時加入NF-κB質(zhì)粒后該誘導作用被下調(diào)，下調(diào)程度隨著NF-κB的

7、加入量的增加而增加，共轉染時加入NF-κB的抑制因子IκBα可以減弱NF-κB質(zhì)粒對CYP3A4表達的影響。這些結果顯示DBDCT對CYP3A4的抑制作用與NF-κB相關。（4）0.5μM、1μM和2μM的DBDCT對CYP3A4 mRNA的表達水平均有下調(diào)作用，與空白對照組相比表達量分別降低至0.75、0.64和0.44倍（p<0.05、p<0.05、p<0.01）。干擾PXR表達后，DBDCT對CYP3A4 mRNA表達具有更強的抑