1、目的：在分子生物學(xué)和遺傳學(xué)中,轉(zhuǎn)錄因子(transcription factor TF)是一類可以和DNA序列特異結(jié)合的蛋白質(zhì),控制著遺傳信息從DNA到RNA轉(zhuǎn)錄的過程。轉(zhuǎn)錄因子以單獨形式或者與其他蛋白形成復(fù)合物的形式通過啟動或者抑制RNA聚合酶來調(diào)控轉(zhuǎn)錄,包含一個或者多個DNA結(jié)合區(qū)域,可以和其調(diào)控的基因的DNA序列結(jié)合。轉(zhuǎn)錄因子從功能上可將轉(zhuǎn)錄因子分為兩類,即普遍性轉(zhuǎn)錄因子和激活轉(zhuǎn)錄因子。普遍性轉(zhuǎn)錄因子是轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物組成成員,主要

2、功能是將RNA聚合酶定位在核心啟動子上,為啟動子起始轉(zhuǎn)錄所必需。激活轉(zhuǎn)錄因子可影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的組裝及轉(zhuǎn)錄效率,決定某一基因是否表達。它們在真核生物基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中占有十分重要的地位,是基因表達調(diào)控的核心內(nèi)容之一。Fankl(fibronectin typeⅢ and ankyrin repeat domains1)是一個睪丸特異表達基因,編碼一種核蛋白,在精子發(fā)生過程的減數(shù)分裂到單倍體階段廣泛表達,相關(guān)實驗表明該蛋白為睪丸組織特異T

3、F。前期研究中我們已經(jīng)運用CAST實驗篩選得到與Fankl特異結(jié)合的DNA靶點。本研究中通過基因芯片分析得到差異表達基因,進行聚類分析,相互作用分析,找出與Fankl相互作用的一組基因,為進一步找出Fankl的信號通路奠定基礎(chǔ)。對該基因的深入研究可能會有助于對精子發(fā)生及調(diào)控機制的深入了解,從而對揭示精子發(fā)生的精細調(diào)節(jié)起到關(guān)鍵性作用。
　　 方法：通過基因芯片分析Fank/Knockdown(KD)小鼠與同窩陰性小鼠,獲得差異表達

4、的基因。生物信息學(xué)網(wǎng)站和軟件對差異表達基因進行聚類分析,相互作用分析,找出與Fankl相互作用的網(wǎng)絡(luò)。把差異表達基因啟動子與我們前期實驗得到的與Fankl TF特異結(jié)合的DNA核心序列進行比對,從而得到受Fankl調(diào)控的下游基因。我們從中挑選出感興趣的基因,在細胞水平,構(gòu)建一個Fankl表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞,檢測目的基因表達變化,驗證目的基因和Fankl的相互作用;在動物水平,通過檢測KD小鼠和同窩陰性小鼠睪丸組織目的基因表達差異,

5、驗證芯片結(jié)果;通過檢測KD小鼠和同窩陰性小鼠心、肝、肺、腎、睪丸組織中目的基因的表達,驗證差異表達是否發(fā)生在睪丸組織中。
　　 結(jié)果：
　　 1、芯片分析得到差異表達的基因355個,其中上調(diào)243個,下調(diào)112個。在這些數(shù)據(jù)中,差異趨勢一致的有25個,其中上調(diào)16個,下調(diào)9個。
　　 2、差異趨勢一致的差異表達基因中有10個基因的啟動子中含有CAST得到的與Fankl轉(zhuǎn)錄因子特異結(jié)合的核心序列(AAAAAG)。<