1、目的：原發(fā)性肝癌（以下簡稱肝癌）是最常見的惡性腫瘤之一，2015年腫瘤相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，我國肝癌發(fā)病率占惡性腫瘤的第四位，死亡率占惡性腫瘤的第三位，其中男性發(fā)病率與死亡率較高，男女比例約為3∶1;其中90％為肝細胞型肝癌，已經(jīng)成為嚴重威脅我國人民生命健康的惡性腫瘤之一。肝癌的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素，但對于具體機制我們還不甚了解。肝細胞癌發(fā)病率的顯著性別差異表明性激素在發(fā)病機制中的重要作用。其中，雄激素已經(jīng)被證明可誘導(dǎo)和促進肝細

2、胞癌的發(fā)展，且通過結(jié)合高親和力的雄激素受體(AR)發(fā)揮生物學(xué)功能。AR屬于核受體家族的成員，可作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控特定基因的表達。ATAD2基因定位于人染色體8q24.13，在一些腫瘤中參與調(diào)控染色質(zhì)動力活性、基因組轉(zhuǎn)錄活性和細胞凋亡過程，其表達異常會導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展。以往有研究表明，在前列腺癌中，ATAD2直接與AR相互作用，并增強AR的活性，在雄激素刺激基礎(chǔ)上，ATAD2和AR一起被招募到特定AR靶基因上并調(diào)節(jié)它們的表達，從而促進

3、前列腺癌的增殖。但是ATAD2與雄激素及AR的相互作用，在肝細胞癌中的作用及影響還未見報道。本研究通過明確雄激素及AR與ATAD2在肝細胞癌中發(fā)揮的作用，探討對肝癌生物學(xué)行為的作用機制。
　　方法：運用STRING(version10.0)軟件預(yù)測ATAD2與AR的相互作用可能性;分別用RT-PCR與Western-blot方法檢測不同肝癌細胞系中ATAD2與AR的表達量;分別運用CCK8、克隆形成實驗、細胞侵襲與遷移實驗驗證肝癌

4、細胞增殖、克隆形成與侵襲、遷移能力;運用免疫熒光實驗檢測細胞中蛋白的分布;運用基因芯片檢測基因表達量的變化;運用流式細胞儀檢測細胞周期與凋亡能力;運用免疫共沉淀檢測蛋白間相互作用強度;運用免疫組化實驗檢測肝癌組織中蛋白的分布情況，并分析與臨床病理因素間的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.雄激素(DHT)可促進肝癌細胞系LM3、Huh7增殖、侵襲及遷移能力，并進ATAD2基因表達量增高，且可被雄激素受體拮抗劑(CDX)阻斷;
　　2.在雄

5、激素(DHT)作用下，ATAD2與雄激素受體(AR)可共沉淀;
　　3.在雄激素(DHT)作用下，下調(diào)AR后，ATAD2表達量降低;下調(diào)ATAD2后，基因芯片顯示APC基因表達上調(diào);實驗顯示下調(diào)ATAD2后，β-catenin分布改變，靶基因表達量下調(diào)，EMT相關(guān)基因表達量改變，細胞增殖、侵襲與遷移能力下降，促進細胞凋亡、抑制細胞周期進展;
　　4.肝癌組織AR、ATAD2、β-catenin與臨床病理因素分析顯示，AR與T