1、本研究在于探尋一種利用單個(gè)核細(xì)胞為初始接種細(xì)胞，獲得高純度和高活性自然殺傷(NK)細(xì)胞的新方法，為NK細(xì)胞免疫治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。收集3份健康足月孕婦的臍帶血，密度梯度分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，每份細(xì)胞樣本分別接種于經(jīng)抗人CD16mAb，CD3mAb和CD16mAb+CD3mAb鋪板的培養(yǎng)瓶中。使用含自體血漿、重組人IL-2，IL-15和IL-21的無血清培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)擴(kuò)增14d。計(jì)算擴(kuò)增倍數(shù)，并利用流式細(xì)胞術(shù)測定CD56+C

2、D3-細(xì)胞的比例。以白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞為靶細(xì)胞，利用MTT實(shí)驗(yàn)測定所培養(yǎng)NK細(xì)胞在不同效靶比條件下的殺傷率。結(jié)果表明，培養(yǎng)14d后，CD16mAb，CD3mAb和CD16mAb+CD3mAb組細(xì)胞總數(shù)分別擴(kuò)增45.71±5.54、87.41±19.77和51.84±4.88倍，CD3mAb組顯著高于其它2組(P＜0.05)。培養(yǎng)前CD56+CD3-細(xì)胞比例為0.1663±0.0201，經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增14d后CD16mAb，CD3mAb

3、和CD16mAb+CD3mAb組CD56+CD3-細(xì)胞比例分別為0.8167±0.0500、0.8077±0.0589和0.8077±0.0273，3組無顯著差別。培養(yǎng)14d后，MTT殺傷實(shí)驗(yàn)顯示，效靶比為1∶1、5∶1和10∶1時(shí)，3組殺傷效率均無顯著差別(P＞0.05)。結(jié)果提示，使用抗CD3mAb及IL-2，IL-15和IL-21培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞，可獲得高純度和高殺傷活性的NK細(xì)胞。本研究為NK細(xì)胞的體外純化擴(kuò)增提供了一個(gè)簡單有效的