1、早發(fā)性卵巢功能不全(POI)是一種多病因引起的女性在40歲前卵巢功能減退，臨床表現(xiàn)為停經(jīng)或月經(jīng)稀發(fā)4-6個(gè)月，間隔＞4周連續(xù)兩次卵泡刺激素(FSH)＞25 IU/L。近年來，業(yè)界普遍認(rèn)為過去常用的卵巢早衰（POF）不能體現(xiàn)該疾病的發(fā)生發(fā)展過程，因而診斷標(biāo)準(zhǔn)中將FSH數(shù)值由＞40IU/L降至＞25IU/L。診斷閾值的下調(diào)意味著將有更多女性進(jìn)入POI的管理范疇，以便盡早引起婦產(chǎn)科醫(yī)生的關(guān)注，讓POI患者得到及時(shí)的診斷與治療。據(jù)報(bào)道，POF的

2、發(fā)病率約為1％，中國(guó)女性中的發(fā)病率約為2.8％，該病對(duì)女性的健康及生育力會(huì)造成嚴(yán)重影響，導(dǎo)致不孕、骨質(zhì)疏松、泌尿生殖器官萎縮、心血管疾病、認(rèn)知功能減退及抑郁等，應(yīng)在臨床上得到早期的診斷和干預(yù)，以提高患者的生活質(zhì)量，目前該病已成為婦科生殖內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
　　由于本課題中進(jìn)行基礎(chǔ)研究的病例樣本所屬者和臨床研究中跟蹤隨訪的患者均為近4-5年間就診者，且均是以FSH＞40IU/L作為診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的卵巢早衰患者。因此，本文中相關(guān)疾病

3、的描述仍以“卵巢早衰(POF)”為主。
　　卵巢早衰的病因復(fù)雜多樣，包括遺傳學(xué)因素、免疫性因素、醫(yī)源性因素、代謝性因素以及病毒感染等。其中遺傳學(xué)因素被認(rèn)為是首先需要關(guān)注的重要因素，包括染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常，基因變異等。本課題以遺傳學(xué)因素作為卵巢早衰病因研究的切入點(diǎn)，在對(duì)已發(fā)表的與卵巢早衰發(fā)生相關(guān)的基因變異（包括基因多態(tài)性、基因突變等）相關(guān)性文獻(xiàn)進(jìn)行大量閱讀分析的基礎(chǔ)上，篩選出TATA結(jié)合蛋白2(TBP2)這一基因。通過對(duì)近4年來已

4、收集的中國(guó)漢族女性特發(fā)性卵巢早衰病例樣本的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，探討TBP2基因是否參與卵巢早衰的發(fā)病。此外，在臨床研究方面，卵巢早衰所導(dǎo)致的不孕癥是育齡期女性面臨的嚴(yán)峻問題，本課題通過對(duì)確診為卵巢早衰性不孕癥但因有生育要求而采取輔助生殖技術(shù)（自然周期或微刺激周期的體外受精-胚胎移植）助孕的患者進(jìn)行3-4年的跟蹤隨訪，經(jīng)過不同助孕方式及對(duì)應(yīng)生育結(jié)局的比較，初步探討臨床上卵巢早衰患者不同助孕方式的效果及其與妊娠結(jié)局的相關(guān)性。通過上述的基礎(chǔ)研究，一

5、方面，進(jìn)一步探索基因變異與卵巢早衰發(fā)病的相關(guān)性，為深入明確卵巢早衰的遺傳學(xué)病因提供一定的依據(jù)，從而為卵巢早衰的病因分析及早期診斷提供理論依據(jù)。另一方面，上述的初步臨床研究也為卵巢早衰性不孕癥患者通過選擇不同的方式助孕從而獲得較好的生殖結(jié)局提供了一些有價(jià)值的參考，進(jìn)而為臨床應(yīng)用中卵巢早衰的生育相關(guān)性診療提供指導(dǎo)依據(jù)。
　　第一部分卵巢早衰患者TBP2基因的相關(guān)研究
　　目的:前期研究報(bào)道提示，TBP2基因特異性表達(dá)在小鼠卵巢，

6、且該基因敲除的雌性小鼠是不孕的。本研究擬通過檢測(cè)中國(guó)漢族卵巢早衰女性中TBP2基因的7個(gè)外顯子，探討該基因與卵巢早衰發(fā)病的關(guān)系。
　　方法:研究對(duì)象為南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診就診并被確診的中國(guó)漢族特發(fā)性卵巢早衰患者60例及年齡匹配、月經(jīng)正常、性激素檢查在正常范圍的對(duì)照女性60名，收集其外周血樣本納入研究。采用血基因組DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞中的DNA，并用UCSC ExonPrimer online software設(shè)

7、計(jì)針對(duì)TBP2基因的引物，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)特異性擴(kuò)增TBP2基因所有7個(gè)外顯子的編碼區(qū)及其側(cè)翼序列，并對(duì)POF試驗(yàn)組和對(duì)照組的TBP2基因擴(kuò)增序列進(jìn)行測(cè)序分析，所得序列利用核苷酸序列比對(duì)編輯工具以及哈代-溫伯格平衡定律(HWE)等進(jìn)行綜合分析。關(guān)于TBP2基因錯(cuò)義突變所致的潛在功能性或結(jié)構(gòu)性影響則由基于ClustalX和PolyPhen2的程序進(jìn)行預(yù)測(cè)。另外，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)比較單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)的基因型和等位基因頻率

8、在卵巢早衰組及對(duì)照組間的分布情況。
　　結(jié)果:測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在卵巢早衰組和對(duì)照組中均發(fā)現(xiàn)一個(gè)常見的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(c.92G＞ C)，兩組中該位點(diǎn)的基因型分布和等位基因頻率的比較也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且沒有結(jié)果表明出現(xiàn)合理的致病性突變。
　　結(jié)論:研究顯示，中國(guó)漢族女性中TBP2基因的SNP位點(diǎn)(e.92G＞ C)可能與特發(fā)性卵巢早衰的發(fā)生無關(guān)。
　　第二部分卵巢早衰性不孕患者助孕方式的臨床初探
　　目的:卵巢早衰

9、(POF)是一種復(fù)雜的生殖內(nèi)分泌疾病，育齡期的POF女性較難自發(fā)獲得妊娠。本研究擬通過分析50例應(yīng)用自然周期IVF-ET（in vitrofertilization-embryo transplantation）方案或微刺激周期IVF-ET方案的POF性不孕癥女性的生育結(jié)局，評(píng)估這兩種輔助生殖方案的療效，進(jìn)而探討臨床上該類病人不同助孕方式的效果。
　　方法:近4年來在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心收集到POF性不孕癥的女性172

10、例（包括應(yīng)用自然周期方案的74例和應(yīng)用微刺激周期方案的98例），其中有50例患者在應(yīng)用不同方案IVF-ET的助孕方式后成功妊娠。將此50例患者根據(jù)所采用的IVF治療方案分為A，B兩組，A組17人，為應(yīng)用自然周期方案獲得妊娠，B組33人，為應(yīng)用微刺激周期方案獲得妊娠。所有納入的患者均具有正常的染色體核型(46，XX)，已排除盆腔因素或其它系統(tǒng)性疾病所致的不孕，其伴侶均具有良好的生育能力。回顧性分析所有研究對(duì)象的年齡、初潮年齡、身體質(zhì)量指數(shù)

11、(BMI)、不孕年限、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)，泌乳素(PRL)等性激素水平，雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)(AFC)、甲狀腺功能以及她們的生育結(jié)局，從而評(píng)估不同助孕方式的療效。
　　結(jié)果:對(duì)于A、B兩組不孕癥患者，在進(jìn)行輔助生殖技術(shù)(ART)治療前，血FSH水平均高于40 IU/L（符合POF的診斷標(biāo)準(zhǔn)）。基本情況方面，兩組患者在年齡、初潮年齡、BMI、不孕年限，妊娠次數(shù)及基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)等方面均無明顯

12、差異。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用雌孕激素聯(lián)合序貫治療(HRT)三個(gè)月以上，檢測(cè)兩組患者的性激素水平，結(jié)果顯示，A，B兩組患者的血FSH、LH及E2水平分別為[A組:FSH(10.39±5.83) IU/L，LH(3.75±2.07) IU/L，E2(44.53±63.00) pg/ml。B組:FSH(12.18±6.06) IU/L,LH(4.19±1.80) IU/L,E2(43.40±61.35) pg/ml]，比較無顯著差異。此外，A組中含

13、有1例甲狀腺功能異常的患者而B組中有7例，A、B兩組中各包含一例高泌乳素血癥的病患者。生育結(jié)局方面，有14例患者應(yīng)用自然周期方案后獲得臨床妊娠且均為活產(chǎn)，自然周期組的臨床妊娠率為18.9％(14/74)。有29例患者應(yīng)用微刺激周期方案后獲得臨床妊娠，其中活產(chǎn)為25例，因而微刺激周期組的臨床妊娠率為29.6％(29/98)。比較發(fā)現(xiàn)，自然周期組和微刺激周期組在臨床妊娠率方面無明顯差異。除此之外，A組中患者中沒有流產(chǎn)或?qū)m外孕發(fā)生，B組患者中