1、抗菌藥物的廣泛不合理使用，細菌的耐藥性亦日趨嚴重，超級細菌已在世界各地均有發(fā)現(xiàn)。為避免細菌感染，人們往往會采取使用各類消毒劑的方式來對環(huán)境加以消毒，以減少感染病原菌的機會，然而，隨著消毒劑的廣泛不合理使用，細菌對消毒劑也同樣產(chǎn)生了耐藥性，本教研室前期研究表明細菌對消毒劑和抗菌藥物的耐藥具有交叉性，即對抗菌藥物耐藥的細菌對消毒劑有一定耐受性，反之，對消毒劑耐藥的細菌對抗菌藥物亦具有耐藥性。但當前關(guān)于細菌對消毒劑與抗菌藥物間交叉耐藥的機制未

2、有確切報道，為探究交叉耐藥機制開展了本課題的研究，旨在為臨床合理使用抗菌藥物和消毒劑提供理論依據(jù)。
　　1、體外誘導大腸埃希菌ATCC25922獲得多重耐藥菌株
　　基于前期研究選擇了可誘導大腸埃希菌產(chǎn)生耐藥的消毒劑苯扎溴銨及在臨床使用中易導致細菌產(chǎn)生耐藥性的土霉素為試驗藥物，采用微量肉湯稀釋法測定土霉素及苯扎溴銨對大腸埃希菌質(zhì)控菌ATCC25922的MIC。采用多步法分別以亞抑菌濃度(1/2MIC)的土霉素和苯扎溴銨為起點

3、對質(zhì)控菌ATCC25922進行體外誘導，并檢測誘導前后土霉素和苯扎溴銨對受試菌株的最小抑菌濃度(MIC)變化情況。
　　結(jié)果:通過體外誘導獲得了對土霉素和苯扎溴銨均耐藥的菌株A(Oxy)和A(Ben):土霉素對A(Ben)的MIC是誘導前的250倍，對A(Oxy)的MIC是誘導前的320倍，苯扎溴銨對A(Oxy)和A(Ben)的MIC均是誘導前的18倍。
　　結(jié)論:土霉素和苯扎溴銨分別誘導大腸埃希菌后可獲得對消毒劑苯扎溴銨和

4、土霉素均耐藥的菌株。
　　2、AcrAB-TolC在交叉耐藥菌株中的作用研究
　　檢測誘導所得耐藥菌株A(Oxy)和A(Ben)的外排泵基因acrA/B、tolC及其調(diào)控基因marA、soxS、rob較誘導前的變異情況;測定A(Oxy)和A(Ben)的marA、soxS、rob、acrA、acrB、tolC mRNA表達量較誘導前的變化情況。并將A(Oxy)和A(Ben)制備成感受態(tài)細胞，設(shè)計針對marA的siRNA，測定在

5、分別含有不同濃度的土霉素和苯扎溴銨的培養(yǎng)基中加入siRNA后對大腸埃希菌生長的影響。將marA基因連入質(zhì)粒構(gòu)建可過量表達marA的大腸埃希菌，測定土霉素、苯扎溴銨對該菌株的MIC，從正向進一步研究marA表達量變化對大腸埃希菌對藥物敏感性的影響，進而闡釋AcrAB-TolC在大腸埃希菌對土霉素和苯扎溴銨交叉耐藥中的作用。
　　結(jié)果:A(Oxy)和A(Ben)的marA、soxS、rob、acrA、acrB、tolC的基因序列和氨基

6、酸序列與質(zhì)控菌相應序列相比均有不同程度的突變，且A(Oxy)和A(Ben)所有基因堿基序列都有相同位點發(fā)生突變，除rob和acrA外其余基因的氨基酸序列也有在相同位點發(fā)生突變。A(Oxy)和A(Ben)的marA、acrA、acrB、tolC表達量均顯著或極顯著增加，soxS、rob極顯著減少。
　　RNA干擾試驗中，含有1/2MIC土霉素的各試驗組菌液的OD595值在第2小時到第8小時時段內(nèi)顯著或極顯著低于陰性對照組;加入低于M

7、IC濃度的土霉素或苯扎溴銨的各試驗組與對照組相比差異均不顯著;含有大于或等于MIC濃度土霉素或苯扎溴銨的各試驗組細菌未生長。
　　成功構(gòu)建了可過量表達marA的大腸埃希菌，且土霉素、苯扎溴銨對構(gòu)建的可過量表達marA的大腸埃希菌Arctic Express-MarA的MIC值分別是原核宿主菌Arctic Express的64倍和4倍。
　　結(jié)論:誘導所得耐藥菌株A(Oxy)和A(Ben)外排泵基因acrA/B、tolC及其調(diào)

8、控基因marA、soxS、rob的基因突變及表達量變化可能對AcrAB-TolC的表達量有影響，也表明大腸埃希菌對土霉素和苯扎溴銨的交叉耐藥與外排泵AcrAB-TolC有關(guān)，且marA基因?qū)crA/B、tolC的正向調(diào)控作用是土霉素與苯扎溴銨之間交叉耐藥的重要作用機制。
　　從以上試驗結(jié)果可以說明，常見抗菌藥物與消毒劑之間存在交叉耐藥性，其交叉耐藥機制與外排泵耐藥機制具有高度相關(guān)性，提示人類日常生活及畜牧業(yè)生產(chǎn)中應防范濫用該兩類