1、目的:
　　觀察雷公藤紅素對人中性粒細胞mTOR mRNA的表達及組蛋白H3釋放的影響，并探討、分析兩者間關系，探討雷公藤紅素對中性粒細胞組蛋白H3釋放可能存在的劑量效應，及其對中性粒細胞抗感染功能影響，進而為雷公藤在臨床運用上提供基礎實驗結果和理論依據(jù)。建立一種新的評價中性粒細胞吞噬功能的流式細胞儀-石墨烯量子點方法，經(jīng)過優(yōu)化將其初步運用于評價健康人和腫瘤化療后患者中性粒細胞吞噬功能。
　　方法:
　　1.雷公藤紅素

2、對中性粒細胞mTOR表達及組蛋白H3釋放的影響
　　分離健康人外周血中性粒細胞，短暫培養(yǎng)。雷公藤紅素分別按低劑量、中劑量、高劑量三組各干預中性粒細胞1h、1.5h、2h，運用Real-time PCR檢測mTOR mRNA表達，同時平行采用激光共聚焦熒光顯微鏡檢測中性粒細胞組蛋白H3的釋放情況，并分析兩者間關系。
　　2.一種新型熒光材料GQDs評價中性粒細胞吞噬功能的流式細胞術方法初探
　　應用透射電子顯微鏡觀察中性

3、粒細胞吞噬石墨烯量子點情況，進而采用激光共聚焦熒光顯微鏡觀察被吞入中性粒細胞內的石墨烯量子點的熒光特性。對實驗條件進行優(yōu)化，同時使用QuantiBRITE PE標準微球對石墨烯量子點熒光強度進行標準化處理，建立一種新的評價中性粒細胞吞噬功能的流式細胞儀-氧化石墨烯量子點方法;并將此法用于評價健康成人和腫瘤化療后患者中性粒細胞的吞噬功能，初步驗證其可行性。
　　結果:
　　1.雷公藤紅素對中性粒細胞mTOR mRNA表達的劑量

4、效應
　　實驗研究結果顯示，雷公藤紅素在低濃度短時間內可誘導mTOR mRNA表達增加，但隨著干預濃度及時間的延長，mTOR mRNA的表達受到顯著的抑制。
　　2.雷公藤紅素對佛波酯刺激中性粒細胞釋放組蛋白H3的劑量效應
　　低濃度雷公藤紅素在短時間內能夠抑制佛波酯刺激中性粒細胞釋放組蛋白H3，高濃度能促進佛波酯刺激中性粒細胞釋放組蛋白H3。雷公藤干預中性粒細胞1小時后，在佛波酯的刺激下，高濃度組(4.0μM)比對照

5、組(0.0μM)能夠釋放更多量的組蛋白H3，而低濃度(1.0μM)干預1小時時，在佛波酯的刺激下未能釋放組蛋白H3。
　　3.透射電子顯微鏡觀察顯示石墨烯量子點被大量吞入中性粒細胞胞內，在中性粒細胞的吞噬囊泡和偽足內可見密集的石墨烯量子點，與空白對照比較，無非特異性吸附。
　　4.激光共聚焦熒光顯微鏡觀察顯示被吞入中性粒細胞胞內的石墨烯量子點在同一激發(fā)光激發(fā)下發(fā)射不同波長熒光，當發(fā)射波長為408nm呈現(xiàn)明顯藍色，發(fā)射波長為4

6、88nm呈現(xiàn)明顯綠色。
　　5.初步建立一種新的評價中性粒細胞吞噬功能的流式細胞儀-石墨烯量子點方法
　　初步確定實驗優(yōu)化條件:200μl的全血，加入10μl脂多糖(LPS100ng/ml)，12μlGQDs，37℃水浴反應30min。使用QuantiBRITE PE標準微球對石墨烯量子點熒光強度進行標準化處理;并將本方法用于評價健康成人和腫瘤化療后患者中性粒細胞的吞噬功能，結果顯示該法能明顯區(qū)分化療組患者和健康組的中性粒細