1、目的:
　　女性在更年期后體重顯著增加，形成以腹部為中心的肥胖。更年期肥胖會對女性身體及心理健康帶來非常惡劣的影響，可誘發(fā)、加重冠心病、高血壓、高血脂、2型糖尿病、腦卒中、癌癥等重大疾病。因此，對更年期肥胖的防治不容忽視。雌激素水平下降是更年期肥胖的重要原因，但雌激素替代療法存在誘發(fā)癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，臨床上防治更年期肥胖需要新靶點(diǎn)、新思路。能量代謝失衡是肥胖產(chǎn)生的重要原因之一，研究發(fā)現(xiàn)更年期女性雌激素分泌水平下降可導(dǎo)致機(jī)體攝入的能量增多

2、，機(jī)體消耗的能量減少，形成能量代謝失衡，最終導(dǎo)致肥胖。棕色脂肪(brown adipose tissue，BAT)消耗能量產(chǎn)熱是調(diào)節(jié)能量代謝平衡的途徑之一。在卵巢切除大鼠模型中發(fā)現(xiàn)大鼠肩胛區(qū)棕色脂肪產(chǎn)熱功能下降。因此，調(diào)節(jié)棕色脂肪產(chǎn)熱功能可能成為防治更年期肥胖的新切入點(diǎn)之一。5'單磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine5'monophosphate activatedprotein kinase，AMPK)是一種集多種功能于一體的能量

3、感受器和代謝調(diào)節(jié)因子，能夠通過加強(qiáng)外周組織的代謝來調(diào)節(jié)全身的能量代謝平衡，并能促進(jìn)線粒體的合成。肥胖患者及其模型、衰老模型的外周組織中，AMPK的活性顯著下降。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為天癸竭、腎氣虛是更年期肥胖的重要原因，與能量代謝失衡相關(guān)的疲勞乏力、畏寒、少動等癥狀與中醫(yī)范疇中的腎陽虛諸癥相似，棕色脂肪產(chǎn)熱功能可能與腎陽密切相關(guān)。因此，補(bǔ)腎溫陽是中醫(yī)治療更年期肥胖的第一要?jiǎng)?wù)。補(bǔ)腎方劑二仙湯有溫腎陽、補(bǔ)腎精、瀉相火、調(diào)沖任之功，臨床上對于多種更年期相

4、關(guān)疾病有良好的療效。前期研究表明，二仙湯干預(yù)可提高更年期大鼠的胰島素敏感性，達(dá)到有效干預(yù)更年期相關(guān)肥胖的目的。由于棕色脂肪產(chǎn)熱功能下降是肥胖原因之一，本研究基于二仙湯通過補(bǔ)腎氣、溫腎陽調(diào)節(jié)能量代謝平衡，改善卵巢切除大鼠棕色脂肪產(chǎn)熱功能來干預(yù)更年期肥胖的假說，觀察二仙湯對卵巢切除大鼠棕色脂肪產(chǎn)熱相關(guān)蛋白表達(dá)的影響及AMPK在其中的作用。淫羊藿苷是二仙湯君藥淫羊藿的主要成分，其減少卵巢切除大鼠體質(zhì)量增加、改善卵巢切除大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的作用與

5、二仙湯相似。因此，在細(xì)胞水平，我們選用淫羊藿苷作為干預(yù)藥物驗(yàn)證本假說。
　　方法:
　　1.二仙湯對卵巢切除大鼠棕色脂肪產(chǎn)熱相關(guān)蛋白及AMPK磷酸化的影響。
　　40只雌性SD大鼠隨機(jī)平均分為假手術(shù)組(SHAM，等量生理鹽水灌胃)、卵巢切除模型組(OVX，等量生理鹽水灌胃)、二仙湯低劑量組(EXDL，15 mg/kg)、二仙湯高劑量組(EXDH，60 mg/kg)、雌激素組(E，0.01 mg/kg)等五組，卵巢切除術(shù)

6、后第7天分別給予相應(yīng)的藥液連續(xù)灌胃給藥14周。稱取體質(zhì)量、腹腔內(nèi)脂肪質(zhì)量;取血清檢測血脂四項(xiàng);取各組大鼠肩胛區(qū)棕色脂肪，H&E染色觀察各組棕色脂肪形態(tài)學(xué)變化，Western-blot及qPCR檢測各組棕色脂肪產(chǎn)熱相關(guān)蛋白（UCP-1、PGC-1α）的蛋白及其mRNA表達(dá)水平;Western-blot檢測各組棕色脂肪AMPK磷酸化水平。
　　2.淫羊藿苷對棕色脂肪細(xì)胞產(chǎn)熱相關(guān)蛋白的影響及AMPK通路在其中的作用。
　　培養(yǎng)3T

7、3-L1脂肪前體細(xì)胞并誘導(dǎo)其分化為棕色脂肪細(xì)胞，按不同加藥濃度分為空白對照組(CON，0μg/mL)、淫羊藿苷低劑量組(ICAL，25μg/mL)、淫羊藿苷高劑量組(ICAH，50μg/mL)，加藥作用24 h后，應(yīng)用Western-blot及qPCR檢測各組棕色脂肪細(xì)胞產(chǎn)熱相關(guān)蛋白（UCP-1、PGC-1α）的蛋白及mRNA相對水平;加藥作用15 min后，Western-blot檢測各組棕色脂肪細(xì)胞AMPK磷酸化情況;設(shè)阻斷組（含1

8、0μmol/L Compound C的培養(yǎng)液預(yù)處理30 min后再予含ICA50μg/mL培養(yǎng)液干預(yù)24h)檢測UCP-1的蛋白及mRNA水平表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.卵巢切除模型組大鼠體質(zhì)量、腹腔內(nèi)脂肪質(zhì)量與假手術(shù)組大鼠相比顯著增加;卵巢切除模型組大鼠血清總膽固醇水平較假手術(shù)組大鼠顯著升高;二仙湯治療后可降低卵巢切除大鼠體質(zhì)量及腹腔內(nèi)脂肪質(zhì)量，并能降低卵巢切除大鼠血清總膽固醇水平;卵巢切除大鼠肩胛區(qū)棕色脂肪中UCP-

9、1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表達(dá)水平與AMPK磷酸化水平較假手術(shù)組降低;二仙湯治療后可提高卵巢切除大鼠肩胛區(qū)棕色脂肪中UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表達(dá)水平與AMPK磷酸化水平。
　　2.淫羊藿苷組棕色脂肪細(xì)胞UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表達(dá)水平、AMPK磷酸化水平與空白對照組相比升高;AMPK阻斷組與淫羊藿苷組相比，UCP-1蛋白及其mRNA的表達(dá)的水平下降。
　　結(jié)論:
　　1