1、目的：研究在雌性大鼠孕期和體外培養(yǎng)睪丸間質細胞（Leydigcell）中，大豆異黃酮（SIF）暴露對雄性子代生殖發(fā)育可能造成的影響和對Leydig細胞中膽固醇側鏈裂解酶（P450scc）、3β-羥類固醇脫氫酶（3β-HSD）基因表達及睪酮（T）分泌的影響。方法：實驗分兩部分進行。動物實驗部分：SD大鼠按雌雄2：1同籠交配獲取40只孕鼠。將孕鼠隨機分為5組：0mg/kg（對照組）和25mg/kg、50mg/kg、150mg/kg、450m

2、g/kgSIF暴露組。在母鼠孕期13-19天將SIF以花生油為溶劑灌胃染毒。F1雄鼠于出生后第18天檢測其肛殖距、身長、尾長等發(fā)育指標，剖殺稱取睪丸、肝臟和腎臟等內臟重量，用放免法測血清中黃體生成素（LH）和睪酮（T）分泌水平，用實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測睪丸組織中膽固醇側鏈裂解酶（P450scc）、苗勒管抑制物（MIS）和β-雌激素受體（ERβ）的基因表達水平。細胞培養(yǎng)部分：建立SD大鼠Leydig細胞的原代離體培養(yǎng)方法，

3、用3β-HSD染色觀察并鑒定Leydig細胞。獲得純度>90％的Leydig細胞后用SIF進行染毒，染毒劑量分別為0ng/ml（陰性對照組）、50ng/ml、250ng/ml、1000ng/mlSIF組和50ng/ml雌二醇組（陽性對照組），24小時后，用RT-PCR法檢測Leydig細胞中P450scc和3β-HSD的基因表達情況，同時用ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清中P450scc、3β-HSD酶蛋白含量和上清中T分泌水平變化。結果：

4、動物實驗結果顯示：在50mg/kg劑量以下時表現(xiàn)出隨SIF劑量增加促進F1雄鼠的生長發(fā)育，高于50mg/kg時，隨SIF劑量的增加開始表現(xiàn)為抑制F1雄鼠發(fā)育的趨勢，在450mg/kg時睪丸系數(shù)和肛殖距等較對照組有明顯降低（p<0.05）。放免結果顯示SIF對血清LH水平無明顯影響，而血清T水平在150mg/kg、450mg/kg卻有明顯的提高（p<0.05）。RT-PCR結果顯示SIF可以降低ERβ表達（p<0.01）；對P450scc

5、表達無明顯影響；在150mg/kg和450mg/kg時可以明顯促進MIS表達（p<0.01）。細胞培養(yǎng)實驗結果顯示：與陰性對照組比較，隨SIF染毒劑量增加，P450scc基因表達和細胞培養(yǎng)上清中P450scc酶蛋白量呈現(xiàn)逐步增加趨勢，而3β-HSD基因表達和細胞培養(yǎng)上清中3β-HSD酶蛋白量呈現(xiàn)逐步降低趨勢，且二者在250ng/ml、1000ng/mlSIF劑量組與陰性對照組比較差異顯著。細胞培養(yǎng)上清液中T水平較陰性對照組有明顯增加（p