1、第一部分 ERCC1和ERCC2基因多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)關(guān)系
　　背景和目的:
　　胃癌是世界上第五大常見腫瘤，發(fā)病率在乳腺癌、前列腺癌、肺癌、大腸癌和宮頸癌之后;致死率居在第四位，在肺癌、乳腺癌、肝癌之后。據(jù)估計(jì)，截止2012年，共有952，000新發(fā)胃癌患者，占所有腫瘤的6.0％。大約有70％（677，000例，包括456，000男性和221，000例女性）的胃癌都發(fā)生在不發(fā)達(dá)地區(qū)，大約有50％的胃癌新發(fā)病例都在中國(guó)

2、。根據(jù)WHO的國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，胃癌在中國(guó)的癌癥順位排名第二，2012年我國(guó)的新確診的胃癌病例為404，996人，因胃癌死亡的患者為325，166人。胃癌的發(fā)生機(jī)制和其他腫瘤一樣，由多種環(huán)境因素和生活方式共同作用導(dǎo)致的，包括幽門螺桿菌感染、長(zhǎng)期飲酒、食用過多的高鹽飲食、喜食腌制食物和熏烤食物、食用不新鮮的食物、少食新鮮的蔬菜和水果以及暴飲暴食等。在遺傳因素方面，之前的研究表明胃癌具有家族聚集性的傾向。同時(shí)暴露于相似的環(huán)境因素

3、和生活方式的危險(xiǎn)因素條件下的胃癌的個(gè)體，胃癌的發(fā)病具有很大的個(gè)體差異，并非所有患者都會(huì)發(fā)生胃癌，這種差異的原因主要是由于遺傳因素導(dǎo)致的。DNA修復(fù)機(jī)制對(duì)于人體基因組的穩(wěn)定性和完整性起著十分重要的作用，這些機(jī)制缺失可能會(huì)增加腫瘤的發(fā)生的易感性。ERCC1和ERCC2是核苷酸切除修復(fù)途徑中的兩個(gè)重要的基因，ERCC1和ERCC2基因的多態(tài)性可能會(huì)導(dǎo)致DNA損傷和DNA加合物進(jìn)行識(shí)別和剪切、核苷酸切除修復(fù)和堿基轉(zhuǎn)錄修復(fù)機(jī)制受損，增加基因組的不

4、穩(wěn)定性，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的易感性。本部分的目的從分子水平探討ERCC1rs11615和rs3212986和ERCC2 rs13181和rs1799793基因多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系，以及基因和環(huán)境因素之間的交互作用，從而為胃癌發(fā)病的綜合防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　2011年3月-2013年3月間，在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院收治接受病理學(xué)確診的胃癌患者206例作為病例組，納入在醫(yī)院接受體檢的健康個(gè)體共242例作為對(duì)照

5、組。采用問卷調(diào)查病例組和對(duì)照組的社會(huì)人口學(xué)特征、生活習(xí)慣、飲食習(xí)慣、消化系統(tǒng)疾病和家族史。納入研究前每個(gè)研究對(duì)象前采用EDTA-Na2抗凝管抽取病例組以及對(duì)照組研究對(duì)象靜脈血5ml并保存?zhèn)溆?。ERCC1 rs11615和rs3212986和ERCC2 rs13181和rs1799793基因多態(tài)性的檢測(cè)采用 polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism

6、(PCR-RFLP)法進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物取10μl用于初步分析，置于3％的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，分析制備品特異性和結(jié)果是否可接受。將其余制備的產(chǎn)物置于-20℃保存。采用SPSS19.0(version19.0，SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α為0.05。
　　結(jié)果:
　　兩組采用x2或t檢驗(yàn)比較一般人口學(xué)特征、生活習(xí)慣及飲食習(xí)慣情況發(fā)現(xiàn)，兩組在飲酒

7、與否(x2=4.48，P=0.032)、喜食酸菜與否（x2=14.46，P＜0.001）、喜食新鮮蔬菜與否(x2=16.55，P＜0.001)、喜食燙食與否(x2=5.43，P=0.023)以及惡性腫瘤家族史(x2=15.93，P＜0.001)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　對(duì)環(huán)境影響因素進(jìn)行多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，性別、飲酒、喜食酸菜、喜食新鮮蔬菜及惡性腫瘤家族史與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。其中性別(OR

8、=2.34，OR95％CI=1.53-3.58)、飲酒(OR=1.57，OR95％CI=1.03-2.38)、喜食酸菜(OR=2.77，OR95％CI=1.60-4.80)及惡性腫瘤家族史(OR=4.15，OR95％CI=1.76-9.80)是胃癌的危險(xiǎn)因素，會(huì)增加罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn);而喜食新鮮蔬菜（OR=0.49，OR95％CI.=0.33-0.74）則是胃癌的保護(hù)性因素，能夠降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　ERCC1 rs11615和rs32

9、12986和ERCC2 rs13181和rs1799793基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。
　　ERCC1rs3212986基因頻率在病例組和對(duì)照組等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.25，P=0.02)。ERCC rs1799793基因頻率在病例組和對(duì)照組基因頻率分布(x2=10.81，P=0.004)和等位基因頻率分布(x2=10.49，P=0.001)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　多因素log

10、istic回歸，調(diào)整環(huán)境混雜因素后結(jié)果顯示:攜帶ERCC1 rs3212986CA和AA基因型的個(gè)體與攜帶ERCC1 rs3212986 CC基因型的個(gè)體相比，個(gè)體患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)分別增加3.15倍(OR=3.15，95％CI=1.29-7.74)和4.23倍(OR=4.23，95％CI=1.82-9.85)。攜帶ERCC1 rs3212986 CA+AA基因型的個(gè)體與攜帶ERCC1rs3212986 CC基因型的個(gè)體相比，患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加

11、1.70倍(OR=1.70，95％CI=1.11-2.62)。
　　與攜帶ERCC2 rs1799793 AA基因型的個(gè)體相比，攜帶ERCC2 rs1799793 AC和CC基因型的個(gè)體患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加2.33倍(OR=2.33，95％CI=1.14-4.79)和3.67倍(OR=3.67，95％CI=1.82-7.42)。另外，攜帶ERCC2 rs1799793 AC+CC基因型的個(gè)體與攜帶ERCC2 rs1799793 AA基

12、因型的個(gè)體相比，患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加1.54倍(OR=1.90,95％CI=1.26-2.88)。
　　多因素非條件logistic回歸分析并未發(fā)現(xiàn)ERCC1 rs11615和ERCC2 rs13181基因多態(tài)性能夠增加胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(P＞0.05)。
　　分層分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERCC1 rs3212986基因多態(tài)性與飲酒、喜食酸菜和惡性腫瘤家族史對(duì)胃癌易感性有交互作用。另外，ERCC2 rs1799793基因多態(tài)性與飲酒、

13、喜食新鮮蔬菜和惡性腫瘤家族史對(duì)胃癌易感性有交互作用。
　　結(jié)論:研究發(fā)現(xiàn)性別、飲酒、喜食酸菜、喜食新鮮蔬菜及惡性腫瘤家族史與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生相關(guān)關(guān)系。ERCC1rs3212986CA和AA基因型攜帶者和ERCC2rs1799793AC和CC基因型攜帶者能顯著性的增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　第二部分 ERCC1和ERCC2基因多態(tài)性與晚期胃癌患者奧沙利鉑化療預(yù)后的相關(guān)關(guān)系
　　背景和目的:
　　由于早期胃癌癥狀較為

14、隱匿，臨床常常表現(xiàn)為食欲不振、腹痛、腹脹以及體重減輕等等，這些癥狀患者常常不重視，從而導(dǎo)致胃癌確診時(shí)，大多以及到了中晚期并且發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此即使使用手術(shù)治療以及術(shù)后的放化療，胃癌的死亡率也較高。對(duì)于晚期、術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的胃癌患者，失去了最佳手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，只能接受全身的化療，此時(shí)，胃癌患者的預(yù)后極差，化療成為了主要的治療方法。鉑類是治療胃癌的基礎(chǔ)藥物，從第一代的順鉑、第二代的卡鉑以及第三代的奧沙利鉑的漸進(jìn)發(fā)展過程。奧沙利鉑(草酸鉑，

15、LOHP)是在順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類抗腫瘤藥物，奧沙利鉑的特點(diǎn)就是療效更好，毒性更低，藥物的療效和毒性作用得到了很好的較大的改善，并且擴(kuò)大了抗瘤譜，并且和順鉑與卡鉑藥物沒有交叉耐藥性存在。臨床研究結(jié)果表明，使用奧沙利鉑單藥治療初治結(jié)胃癌的療效可達(dá)22％，與5氟尿嘧啶(5.FU)和亞葉酸鈣(LV)方案的療效接近。奧沙利鉑與5-FU和LV聯(lián)合方案的藥物敏感性可以達(dá)到60％。核酸切除修復(fù)途徑中的基因表現(xiàn)出的單核苷酸的多態(tài)性可以導(dǎo)致DNA修

16、復(fù)能力的改變，其中導(dǎo)致氨基酸編碼改變和處于基因調(diào)控區(qū)域的SNP尤其可能改變修復(fù)酶的活性或表達(dá)量的差異，從而影響DNA的修復(fù)能力。核酸切除修復(fù)途徑中的的ERCC1和ERCC2基因的多態(tài)性可能會(huì)影響蛋白功能，包括DNA損傷、識(shí)別和剪切DNA的加合物、損傷核苷酸切除修復(fù)和堿基轉(zhuǎn)錄修復(fù)的機(jī)制，從而導(dǎo)致了DNA的不穩(wěn)定性，最終影響了DNA的修復(fù)功能。當(dāng)癌癥患者接受化療后，化療藥損傷癌細(xì)胞，如患者的DNA修復(fù)功能增強(qiáng)時(shí)，對(duì)鉑類等化療藥物癌細(xì)胞的損傷

17、及時(shí)修復(fù)，從而產(chǎn)生耐藥性，但是當(dāng)DNA修復(fù)功能降低時(shí)，對(duì)鉑類等化療藥物癌細(xì)胞的損傷修復(fù)活性降低，因此對(duì)鉑類等化療藥物的敏感性增強(qiáng)。因此可以推測(cè)， ERCC1和ERCC2基因多態(tài)性能夠影響患者對(duì)于鉑類藥物化療的敏感性，最終影響患者的預(yù)后。
　　方法:
　　2010年3月-2013年3月間，在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院收治接受病理學(xué)確診的胃癌患者185例晚期胃癌為病例組（男性124例，占67.03％;女性61例，占32.97％;

18、平均年齡為58.79+9.17歲），采用面對(duì)面問卷調(diào)查的方式收集調(diào)查對(duì)象的信息，并抽取調(diào)查對(duì)象外周靜脈血5ml，采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)進(jìn)行抗凝處理并保存待測(cè)。對(duì)胃癌患者進(jìn)行每月一次的隨訪，以胃癌死亡作為結(jié)局時(shí)間，采用電話隨訪或者門診復(fù)查隨訪，記錄患者的癌癥進(jìn)展和死亡情況。所有患者隨訪2015年3月。根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)治療效果進(jìn)行的評(píng)估。ERCC1 rs11615和rs3212986和ERCC2 rs13181和rs

19、1799793基因多態(tài)性的檢測(cè)采用 polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpolymorphism(PCR-RFLP)法進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物取10μl用于初步分析，置于3％的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，分析制備品特異性和結(jié)果是否可接受。將其余制備的產(chǎn)物置于-20℃保存。采用SPSS19.0(version19.0，SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

20、分析，所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α為0.05。
　　結(jié)果:
　　采用Log-rank test方法比較，以下的生活習(xí)慣和飲食習(xí)慣患者生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有無飲酒史患者(Log-rank test=6.44，P=0.011)、有無惡性腫瘤家族史（Log-rank test=6.21，P=0.013）、化療的敏感性(Log-rank test=48.98，P＜0.001)。ERCC1 rs11615和ERCC2

21、rs1799793基因頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，但ERCC1 rs3212986和ERCC2 rs13181B不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。通過多因素logistic回歸，調(diào)整了性別和年齡因素后，結(jié)果顯示攜帶ERCC1 rs11615 TT基因型的個(gè)體與攜帶ERCC1 rs11615 CC基因型的個(gè)體相比，胃癌患者表現(xiàn)出對(duì)鉑類化療耐藥敏感(OR=0.27，95％CI=0.08-0.96)。攜帶ERC

22、C1 rs11615 CT+TT基因型的個(gè)體與攜帶ERCC1rs11615 CC基因型的個(gè)體相比，胃癌患者表現(xiàn)出對(duì)鉑類化療敏耐藥(OR=0.45，95％CI=0.23-0.90)。然而ERCC1 rs3212986和ERCC2 rs13181和rs1799793基因多態(tài)性并不能影響胃癌患者化療的敏感性(P＞0.05)。采用COX回歸分析和Log-rank分析發(fā)現(xiàn)并未發(fā)現(xiàn)ERCC1 rs11615和rs3212986和ERCC2 rs13