1、作為合成和分泌牙本質(zhì)基質(zhì)的僅有細(xì)胞類型，成牙本質(zhì)細(xì)胞是牙齒發(fā)育形成和牙髓損傷修復(fù)的重要基礎(chǔ)。成牙本質(zhì)細(xì)胞作為一種典型極性化特征明顯的終末分化細(xì)胞，經(jīng)歷了從無(wú)極性細(xì)胞分化為極性化細(xì)胞的過(guò)程，并伴隨著牙本質(zhì)基質(zhì)的分泌礦化。 Runx2是一類在牙齒發(fā)育過(guò)程中一定程度參與調(diào)控某些特異性基質(zhì)蛋白分子轉(zhuǎn)錄的因子。有研究發(fā)現(xiàn)，Runx2在牙胚發(fā)育過(guò)程中存在著時(shí)空表達(dá)的差異性，其不僅參與了成牙本質(zhì)細(xì)胞分化，同時(shí)很可能在極性化過(guò)程中也扮演了重要角色。Rh

2、o蛋白家族的一種小GTP酶Cdc42做為一種細(xì)胞極性開(kāi)關(guān)分子，在細(xì)胞極性化過(guò)程中起著重要作用。細(xì)胞連接的形成和極性蛋白復(fù)合物的定位是細(xì)胞頂?shù)讟O性建立過(guò)程中必不可少的步驟，Par3是上述步驟中的重要調(diào)控分子之一，ZO-1作為緊密連接重要的蛋白分子，在細(xì)胞極性過(guò)程中同樣起到一定的調(diào)控作用。那么，極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在成牙本質(zhì)細(xì)胞分化成熟過(guò)程中有何作用？Runx2是否參與調(diào)控成牙本質(zhì)細(xì)胞極性化的過(guò)程呢?本課題采用多種分子生物

3、學(xué)方法證實(shí)了部分與成牙本質(zhì)細(xì)胞極性建立相關(guān)的分子的表達(dá)以及與Runx2相關(guān)的部分極性相關(guān)分子的表達(dá)，以期進(jìn)一步探索并了解成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化發(fā)育過(guò)程。
　　1.極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在野生小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)提取成熟期野生小鼠的牙髓和OLCs細(xì)胞的總RNA后，用PCR瓊脂糖凝膠電泳和檢測(cè)Cdc42、Par3、ZO-1 mRNA的表達(dá)。取出生后3天、2周野生小鼠及出生前13天、15天、18天野生胚胎小鼠的磨

4、牙牙胚石蠟組織切片，用組織免疫熒光檢測(cè)Cdc42、Par3、ZO-1在小鼠磨牙牙胚發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)。結(jié)果：PCR凝膠電泳顯示Cdc42、Par3、ZO-1在小鼠牙髓和OLCs細(xì)胞的總RNA中均有表達(dá)；Cdc42、Par3、ZO-1參與小鼠磨牙牙胚發(fā)育的整個(gè)過(guò)程，并參與了成牙本質(zhì)細(xì)胞的極性化發(fā)生過(guò)程。
　　2.極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在轉(zhuǎn)基因小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)
　　分別取出生后3天、2周及出生前13

5、天、15天、18天同窩小鼠，取鼠尾組織獲取小鼠DNA，采用PCR瓊脂糖電泳篩選鑒定同窩鼠中的基因鼠；分別取不同發(fā)育時(shí)期的同窩小鼠野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠的磨牙牙胚組織切片后，用HE染色對(duì)比不同發(fā)育階段牙胚間發(fā)育差異和組織免疫熒光檢測(cè)Cdc42、Par3、ZO-1在野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠磨牙牙胚發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)差異；qRT-PCR定量分析極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在出生后3日齡、1周齡和2周齡野生鼠和轉(zhuǎn)基因鼠各鼠系的牙胚中的RNA表