1、背景和目的：急性肺損傷（acute lung injury,ALI）是各種病因，包括肺內(nèi)因素和（或）肺外因素所致的肺泡上皮細(xì)胞和肺內(nèi)毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷，并由此引起肺泡膜通透性改變、肺泡表面活性物質(zhì)被破壞、彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫、透明膜形成、肺泡萎陷。急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）則是急性肺損傷發(fā)生、發(fā)展的結(jié)果。盡管機(jī)械通氣策略的進(jìn)步、體外膜肺氧合（extracorpo

2、real membrane oxygenation,ECMO）的出現(xiàn)，其病死率仍然居高不下。為了尋求更好的治療手段，學(xué)者們開始將目光聚焦在具有組織修復(fù)及再生能力的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上。
　　骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）應(yīng)用于ARDS的治療是一種非常有應(yīng)用前景的手段，研究表明，BM-MSCs能夠歸巢于組織受損部位，并通過細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)在受損部位的炎癥微環(huán)境中發(fā)揮

3、抗炎、抗水腫、減輕內(nèi)皮細(xì)胞通透性等作用，并且BM-MSCs能夠通過自身分泌抗菌肽、增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力、調(diào)節(jié)T細(xì)胞等方式，從而發(fā)揮抗菌作用。此外，近年研究表明，BM-MSCs可能通過線粒體跨細(xì)胞轉(zhuǎn)移到ALI/ARDS的受損肺泡上皮細(xì)胞中，挽救損傷的肺泡上皮，從而減少肺水腫的可能。
　　盡管BM-MSCs具備眾多抗炎作用以及治療急性炎癥所致肺部疾病效果較理想，然而臨床上應(yīng)用其治療慢性炎癥所致肺部疾病仍有爭(zhēng)議。因此，探究BM-MSCs

4、不同時(shí)相干預(yù)對(duì)急性肺損傷的炎癥因子變化及修復(fù)作用能在臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、通過從SD大鼠長(zhǎng)骨中提取骨髓細(xì)胞，通過細(xì)胞貼壁法分離及純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；
　　2、BM-MSCs傳代至第3代后，通過定向誘導(dǎo)，誘導(dǎo)其向成骨、成脂肪、成軟骨方向分化；
　　3、利用免疫熒光抗體對(duì)該細(xì)胞表面CD分子標(biāo)記，通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞表面CD分子陽性表達(dá)率進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)所培養(yǎng)的BM-MSCs進(jìn)行鑒定；

5、　　4、急性肺損傷動(dòng)物模型主要通過尾靜脈注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）構(gòu)建SD大鼠急性肺損傷動(dòng)物模型，并通過病理評(píng)分及動(dòng)物動(dòng)脈血?dú)夥治鰴z測(cè)建模情況，動(dòng)物病理評(píng)分參照2011年《美國(guó)胸科協(xié)會(huì)動(dòng)物急性肺損傷病理評(píng)分》進(jìn)行評(píng)分；
　　5、120只SD大鼠隨機(jī)分成N組（對(duì)照組）、L組（LPS組）及L+M組（LPS+MSCs組），每組40只，并根據(jù)MSCs干預(yù)的不同時(shí)間將各組分成2h、8h、24h、48h、96h

6、五個(gè)亞組，每亞組8只；N組動(dòng)物給予等劑量PBS注射，L組均在起始時(shí)間尾靜脈注射LPS，劑量為5mg/kg，分別在上述時(shí)相予1x106/ml X1ml的劑量MSCs處理后的24h檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中炎性細(xì)胞、炎性標(biāo)記物（TNF-α、IL-1α、IL-10）、動(dòng)脈血血?dú)夥治?、肺組織病理評(píng)分等。
　　結(jié)果：
　　1、成功分離、培養(yǎng)并純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

7、r>　　成功分離出骨髓貼壁細(xì)胞，將其純化后，誘導(dǎo)其向成脂、成骨、成軟骨分化，具備多向分化潛能；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面CD分子結(jié)果為，CD90，CD105陽性率分別為98.89％，97.37%（強(qiáng)表達(dá)間充質(zhì)抗原標(biāo)記物）；CD45，CD34陽性率分別為3.17%，1.41%（弱表達(dá)血管內(nèi)皮表面抗原標(biāo)記物及造血系細(xì)胞表面抗原標(biāo)記物）。結(jié)果表明所分離純化的細(xì)胞即為大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　2、脂多糖明顯降低大鼠PaO2，BM-MSCs干

8、預(yù)使PaO2升高在2h顯著
　　與同時(shí)相N組相比，2hL組、8hL組、24hL組、48hL組PaO2均有明顯下降（P＜0.01）；與同時(shí)相L組比較，2h L+M組PaO2明顯升高（P＜0.05），而其余L+M組無明顯差異（P＞0.05）。
　　3、脂多糖明顯升高BALF中TNF-α、IL-1α、IL-10濃度，BM-MSCs干預(yù)可明顯降低BALF中TNF-α、IL-1α濃度，并明顯升高IL-10濃度
　　TNF-α濃度

9、比較：與同時(shí)相N組相比，各時(shí)相的L組TNF-α濃度均明顯增加（P＜0.05）；與同時(shí)相L組比較，2hL+M組、8hL+M組、24hL+M組、48hL+M組TNF-α濃度均明顯降低（P＜0.05），而其余組無明顯差異（P＞0.05）。 IL-1α濃度比較：與同時(shí)相N相比，各時(shí)相的L組IL-1α濃度均明顯增加（P＜0.05）；與同時(shí)相L組比較，2hL+M組、8hL+M組、24hL+M組IL-1α濃度降低（P＜0.01），而其余L+M組無顯著

10、性差異（P＞0.05）。IL-10濃度比較：與同時(shí)相N組相比，2hL組、8hL組IL-10的濃度明顯增加（P＜0.01），而其余L組無顯著性差異；與同時(shí)相L組比較，各時(shí)相L+M組IL-10的濃度均增加（P＜0.05）。
　　4、脂多糖使BALF中PMN明顯增多，BM-MSCs干預(yù)使PMN降低在2h、8h顯著
　　與同時(shí)相N組相比，各時(shí)相L組PMN總數(shù)均有明顯增加（P＜0.01）；與同時(shí)相L組比較，2hL+M組、8hL+M組P

11、MN總數(shù)明顯下降（P＜0.05），其余L+M組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　5、脂多糖使肺濕/干（W/D）明顯增加，BM-MSCs干預(yù)使PMN降低在2h、8h、24h顯著
　　與同時(shí)相N組相比，各時(shí)相L組W/D均有增加（P＜0.01）；與同時(shí)相L組比較，2hL+M組、8hL+M組、24hL+M組W/D均有降低（P＜0.05），而其余L+M組雖W/D無顯著性差異（P＞0.05）。
　　6、脂多糖導(dǎo)致急性肺損傷，BM

12、-MSCs干預(yù)對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷病理評(píng)分降低在2h、8h、24h顯著
　　與同時(shí)相N組比較，各時(shí)相L組ALI病理評(píng)分均有增加（P＜0.05）；與同時(shí)相L組比較，2hL+M組、8hL+M組、24hL+M組ALI病理評(píng)分均有下降（P＜0.05），而其余L+M組無顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1、從骨髓中體外分離出貼壁細(xì)胞，通過貼壁法純化細(xì)胞，將其進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化為骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及軟骨細(xì)胞，并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面