產(chǎn)藏紅花酸的人工酵母細(xì)胞的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了實(shí)現(xiàn)微生物異源合成天然類胡蘿卜素藏紅花酸,以一株產(chǎn)β-胡蘿卜素的釀酒酵母為底盤細(xì)胞,利用合成生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建人工酵母細(xì)胞。通過在染色體整合藏紅花酸生物合成關(guān)鍵酶β-胡蘿卜素羥化酶(CrtZ),并以質(zhì)粒的形式導(dǎo)入玉米黃質(zhì)裂解雙加氧酶(CCD)和醛脫氫酶(ALD)。由于酵母內(nèi)源含有醛脫氫酶,所以首先對8種來源CrtZ和4種CCD進(jìn)行組合表達(dá)并篩選,由歐文氏菌來源的CrtZ和藏紅花來源的CCD形成組合的菌株獲使得藏紅花的最高產(chǎn)量約為231μ

2、g/L。之后繼續(xù)對3種不同來源的ALD進(jìn)行篩選,來自集胞藻來源的ALD效果最好,使得藏紅花酸的產(chǎn)量提高了1.88倍(從231μg/L提高到434μg/L),最終篩選出了合成藏紅花酸最優(yōu)的基因來源。
  為了提升藏紅花酸的產(chǎn)量,通過競爭路徑的敲除及提高基因表達(dá)量進(jìn)一步提高前體玉米黃質(zhì)的產(chǎn)量。法尼基焦磷酸(FPP)作為合成萜烯類天然產(chǎn)物的重要前體,通過敲除Lpp1和Dpp1基因,削減法尼基焦磷酸向法呢醇的轉(zhuǎn)化,為玉米黃質(zhì)的合成提供更多

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