擬南芥抗La突變體的篩選及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、我國(guó)是稀土消費(fèi)大國(guó),稀土農(nóng)用已經(jīng)成為我國(guó)第三大稀土消費(fèi)市場(chǎng)。隨著稀土元素(Rare Eareth Elements)的農(nóng)業(yè)應(yīng)用日趨廣泛,特別是隨著稀土化肥的推廣,加速了土壤與環(huán)境中稀土元素的富集和積累。由于稀土是重金屬,過量的稀土進(jìn)入土壤和環(huán)境后對(duì)生態(tài)環(huán)境和人類健康的影響,已引起全社會(huì)的廣泛關(guān)注。目前關(guān)于稀土農(nóng)用在土壤中累積后對(duì)生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生的影響研究已取得了一定成果,但稀土對(duì)植物的作用機(jī)理的研究尚不完善。
   擬南芥(Arab

2、idopsis thaliana)是一種模式植物,生物學(xué)的不同領(lǐng)域都對(duì)這一遺傳資源進(jìn)行了大力開發(fā)和利用。擬南芥屬于高等植物中的十字花科植物,具有個(gè)體小、生長(zhǎng)周期短、易于培養(yǎng)、種子數(shù)量多、基因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單且基因組序列已經(jīng)全部測(cè)序,研究成果易于轉(zhuǎn)化等特點(diǎn),因此擬南芥被稱為植物界的“果蠅”。作為模式植物,擬南芥更為重要的一個(gè)特點(diǎn)是非常容易通過誘導(dǎo),產(chǎn)生大量的突變體,人工誘變產(chǎn)生突變體的方法有很多種,其中較為常用的有輻射誘變、插入誘變和化學(xué)誘變等。

3、擬南芥的許多突變體己被廣泛用于植物發(fā)育和代謝途徑的研究。擬南芥突變體的篩選已成為研究許多重要理論問題的前提。在稀土農(nóng)用研究中利用擬南芥的工作還很少,目前除了筆者所在課題組之外還沒有關(guān)于擬南芥抗稀土元素突變體篩選的研究。
   本研究在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上篩選出了擬南芥抗La突變體,為L(zhǎng)a抗性基因定位提供了基礎(chǔ)材料。擬南芥抗La突變體的研究將從基因角度闡明稀土積累的遺傳效應(yīng),進(jìn)一步完善稀土農(nóng)用的環(huán)境安全性評(píng)價(jià)體系。
   篩選

4、方法試驗(yàn)中,在雙層培養(yǎng)基試驗(yàn)中,根在50mg/kg La3+濃度稀土培養(yǎng)基中仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。由于擬南芥幼苗莖和葉片處于非脅迫條件,根吸收的La向上部轉(zhuǎn)運(yùn)的很少,導(dǎo)致幼苗可以忍受比根更高濃度的脅迫??紤]到雙層培養(yǎng)基每皿的接種量有限,種子發(fā)芽不一致,根生長(zhǎng)條件很難控制,因而選用了較為簡(jiǎn)單的根向地性彎曲生長(zhǎng)為突變指標(biāo)的篩選方法。
   篩選壓力的確定,通過一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)的對(duì)比發(fā)現(xiàn)擬南芥在7-13mg/kgLa3+水平培養(yǎng)基上根生長(zhǎng)處

5、于抑制狀態(tài),但仍能生長(zhǎng);在14mg/kg及以上濃度基本不生長(zhǎng)。最終確定了在pH5.5,1%瓊脂濃度條件下,14mg/kgLa3+濃度為最適宜篩選壓力。
   通過對(duì)使用不同誘變方法所獲得的誘變后代進(jìn)行篩選。其中EMS誘變的M2代種子通過上述確定的篩選濃度和篩選方法進(jìn)行篩選,共篩選到239株可能突變體,在營(yíng)養(yǎng)土中培養(yǎng),分單株收獲。
   對(duì)獲得的239株可能突變體用上述方法進(jìn)一步復(fù)篩,得到了58株疑似突變體,在營(yíng)養(yǎng)土中培養(yǎng)

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