擬南芥耐高鹽低鉀突變體的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、植物在生長(zhǎng)發(fā)育過程中會(huì)受到很多脅迫的影響,鹽脅迫和缺鉀脅迫最為常見。植物對(duì)鹽脅迫的適應(yīng),在缺鉀土壤中對(duì)鉀離子的吸收都是一個(gè)很復(fù)雜的過程。植物對(duì)于鹽脅迫和低鉀脅迫的反應(yīng)大多是生長(zhǎng)發(fā)育受到抑制,葉子出現(xiàn)黃化,逐漸黃化死亡,另外對(duì)于低鉀的的反應(yīng)還有側(cè)根的增多和負(fù)向地性。對(duì)植物在脅迫條件下做出的表型反應(yīng)進(jìn)行分析,尋找與脅迫有關(guān)的基因,進(jìn)一步了解基因的功能和反應(yīng)機(jī)制,這不僅對(duì)揭示植物的耐逆機(jī)理有重要的意義,而且對(duì)耐逆作物的培育也非常重要。

2、  本實(shí)驗(yàn)以模式植物擬南芥為材料,通過在不同的鹽、鉀脅迫條件下對(duì)大量的突變體進(jìn)行篩選,想要獲得與鹽脅迫和低鉀脅迫相關(guān)表型的突變體,進(jìn)而進(jìn)行分子生物學(xué)的分析得到相關(guān)的基因。主要結(jié)果如下:
  1、耐高鹽突變體的篩選
  (1)在耐高鹽的突變體篩選過程中,通過多次對(duì)不同鹽濃度的摸索,最終將NaCl篩選濃度定在200 mmol/L,在這個(gè)濃度下野生型的根生長(zhǎng)開始受到明顯的抑制。我們篩選的是在這個(gè)條件下根能繼續(xù)生長(zhǎng)的突變體。

3、  (2)結(jié)果在對(duì)5000多株激活標(biāo)簽突變體篩選的過程中,T1代中有137株表現(xiàn)出耐鹽表型,但在對(duì)T2代進(jìn)行復(fù)篩時(shí),沒能發(fā)現(xiàn)可遺傳的耐鹽性狀。
  2、耐高鹽低鉀和低鹽低鉀敏感突變體的篩選
  因?yàn)樵诘外浥囵B(yǎng)基中低濃度的鈉對(duì)鉀的吸收有一定的補(bǔ)償作用,設(shè)計(jì)了在高鹽低鉀和低鹽低鉀兩個(gè)條件來進(jìn)行突變體的篩選,想找到能夠存在鈉鉀吸收特殊機(jī)制的突變體。
  (1)在篩選條件的摸索過程中,對(duì)五種不同的低鉀培養(yǎng)基的固體支持物進(jìn)行分析

4、,最終選擇了Seakem LE Agarose,使低鉀培養(yǎng)基的本底鉀離子濃度在43.07μmol/L,在此低鉀濃度下野生型擬南芥的根生長(zhǎng)會(huì)受到抑制。因?yàn)殁c對(duì)鉀的補(bǔ)償作用,在低鉀培養(yǎng)基中外加低濃度的鹽,根會(huì)繼續(xù)生長(zhǎng),隨著鹽濃度的升高,根的生長(zhǎng)逐漸受到抑制,最終將外加50 mmol/L和150 mmol/L分別定為低鉀低鹽敏感突變體,耐低鉀高鹽突變體的篩選條件。
  (2)在分別對(duì)900株激活標(biāo)簽突變體的耐高鹽低鉀和低鹽低鉀敏感突變體

5、的篩選過程中,T1代中37株表現(xiàn)為耐高鹽低鉀的表型,92株表現(xiàn)為低鹽低鉀敏感表型,但在T2代中沒能找到表型穩(wěn)定遺傳的突變體。
  3、低鉀敏感突變體的篩選
  (1)在低鉀敏感突變體的篩選中,以普通瓊脂粉為固體支持物,低鉀培養(yǎng)基中本底鉀離子濃度在66.7μmol/L,在此條件下野生型擬南芥的根生長(zhǎng)不會(huì)受到抑制,篩選的是對(duì)低鉀敏感、根不再繼續(xù)生長(zhǎng)的突變體。
  (2)在495株突變體植株中找到1株能夠穩(wěn)定遺傳低鉀敏感表型

6、的植株,表型表現(xiàn)為主根的生長(zhǎng)受到抑制。
  (3)在對(duì)穩(wěn)定遺傳低鉀敏感突變體的生理性狀分析得到:無論在正常培養(yǎng)基還是低鉀培養(yǎng)基,突變體的生物量比野生型要少,且差異顯著。葉綠素含量要少但差異不顯著。突變體在1/2MS培養(yǎng)基上的鉀離子含量比野生型的低,在低鉀培養(yǎng)基上突變體鉀離子含量比野生型略高,但差異不顯著。在與其它鉀突變體lks1,hak5,akt1,sas的表型比較發(fā)現(xiàn),突變體的表型與已知突變體的表型不一致,lks1,hak5,a

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