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文檔簡介
1、目的:
辣椒素(Cap)是從辣椒植物中提取,具有刺激性氣味的生物堿。近來研究已報道了心血管疾病中辣椒素的保護作用。線粒體被認為是細胞凋亡的控制中心,在凋亡信號通路中起著非常重要的作用。14-3-3η可能作為心肌細胞I/R損傷的保護因子,參與穩(wěn)定線粒體膜電位,防止線粒體通透性轉換孔(mPTP)的開放,從而最終減少細胞凋亡。本實驗構建細胞水平的A/R模型,旨在確定辣椒素預處理對抗A/R損傷保護心肌細胞的作用是否涉及線粒體凋亡通路,
2、并進一步探討辣椒素保護心肌細胞的可能機制。
方法:
在本研究采用H9c2心肌細胞株,建立急性心肌A/R損傷模型,將狀態(tài)良好的H9c2心肌細胞隨機分為6組:
(1)正常對照組(Control);
(2)缺氧/復氧組(A/R);
(3)10μM辣椒素預處理組(Cap+A/R);
(4)10μM辣椒素+AD-14-3-3ηRNAi預處理組(Cap+AD-14-3-3ηRNAi+A/R
3、);
?。?)10μM辣椒素+ADscrRNAi預處理組(Cap+ADscrRNAi+A/R);
?。?)10μM辣椒素+2μM ABT-737預處理組(Cap+ABT-737+A/R)。MTS比色法檢測細胞存活率,分光光度法檢測各組細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放,線粒體通透性轉換孔(mPTP)開放的程度和半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)活性;流式細胞儀檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)的產(chǎn)生和細胞凋亡水平;Western
4、blotting(免疫印跡)檢測14-3-3η,抗凋亡Bcl-2蛋白和促凋亡Bax蛋白的表達。
結果:
1.各辣椒素濃度實驗組缺氧復氧處理后,Cap的預處理能夠以劑量相關性增加心肌細胞的存活率,減少心肌細胞的LDH釋放,10μM辣椒素預處理組減輕心肌細胞損傷具有統(tǒng)計學意義。
2.與A/R組相比,終濃度為10μM的Cap預處理顯著減弱ROS的產(chǎn)生,抑制的mPTP開放和caspase-3活化,明顯下調(diào)Bax的表
5、達和上調(diào) Bcl-2和14-3-3η的表達,并最終顯著減少 H9c2心肌細胞的凋亡。
3.辣椒素預處理H9c2心肌細胞前,加入14-3-3ηRNAi腺病毒明顯削弱Cap預處理抗H9c2心肌細胞A/R損傷的保護作用。此外,與Cap+A/R組比較,加入ABT-737(Bcl-2抑制劑)也顯著削弱Cap保護心肌細胞的作用。
結論:
辣椒素預處理能夠抑制線粒體凋亡通路,對抗H9c2心肌細胞的缺氧復氧損傷;辣椒素對心
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