1、PHF8屬于組蛋白去甲基化家族成員，在腦部發(fā)育和神經(jīng)發(fā)育的過(guò)程中起到重要作用；同時(shí)PHF8還能參與多種病理過(guò)程，包括X染色體連鎖智力發(fā)育遲緩和腫瘤發(fā)生。但是PHF8自身的異常調(diào)控以及PHF8在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制尚不明確。在該研究中我們我們通過(guò)體內(nèi)外的去泛素化實(shí)驗(yàn)闡明了USP7通過(guò)其去泛素化酶活性去除PHF8的泛素基團(tuán)，從而穩(wěn)定PHF8。接下來(lái)，我們運(yùn)用RNA-seq技術(shù)篩選出兩者共同調(diào)控轉(zhuǎn)錄的靶基因cyclin A2，通過(guò)免疫

2、組化、細(xì)胞及動(dòng)物模型的表型實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了PHF8/USP7通過(guò)上調(diào)cyclin A2的轉(zhuǎn)錄從而影響乳腺癌細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步，我們發(fā)現(xiàn)在DNA損傷時(shí)，PHF8與USP7的相互作用有所加強(qiáng); USP7介導(dǎo)的PHF8穩(wěn)定性調(diào)節(jié)可以通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞的雙鏈損傷修復(fù)使細(xì)胞抵抗DNA損傷。
　　目的：探索PHF8自身異常調(diào)控以及PHF8在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1、PHF8與USP7具有直接相互作用。通過(guò)免疫親和純

3、化與質(zhì)譜分析鑒定出了與PHF8有相互作用的蛋白質(zhì)去泛素化酶USP7，并且運(yùn)用免疫共沉淀和昆蟲(chóng)細(xì)胞純化蛋白在體內(nèi)、體外驗(yàn)證了它們存在直接相互作；PHF8的C端不含明顯結(jié)構(gòu)域的部分與USP7的N端的MATH結(jié)構(gòu)域?yàn)槎呦嗷プ饔盟蕾嚨慕Y(jié)構(gòu)域。
　　2、USP7通過(guò)去泛素化酶活性特異性地穩(wěn)定PHF8蛋白水平。USP7能夠通過(guò)相互作用與PHF8結(jié)合，再通過(guò)其自身去泛素化酶活性，催化去除PHF8上多聚泛素鏈，抑制PHF8通過(guò)泛素-蛋白酶體途

4、徑發(fā)生降解。
　　3、USP7/PHF8調(diào)控軸能夠正向激活cyclin A2信號(hào)通路。PHF8和USP7能夠共同激活多個(gè)下游靶基因，這些靶基因在細(xì)胞周期、DNA復(fù)制等通路中發(fā)揮重要作用。其中，cyclin A2是USP7和PHF8共同的下游靶基因，USP7和PHF8能夠正向調(diào)控CCNA2的轉(zhuǎn)錄；PHF8能夠直接結(jié)合在CCNA2的啟動(dòng)子區(qū)域；USP7則通過(guò)PHF8間接調(diào)節(jié)CCNA2的轉(zhuǎn)錄。
　　4、PHF8能夠調(diào)節(jié)USP7的轉(zhuǎn)

5、錄，兩者形成正反饋循環(huán)。USP7同時(shí)也是PHF8的下游靶基因，能夠受到PHF8的正向調(diào)節(jié)。兩者形成正反饋的回路：一方面，USP7在蛋白水平上穩(wěn)定PHF8的蛋白水平；另一方面，PHF8又可以調(diào)節(jié)USP7的mRNA水平，促進(jìn)USP7的轉(zhuǎn)錄。兩者相互依存，相互影響，相互促進(jìn)。
　　5、USP7/PHF8調(diào)控軸促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖與腫瘤生長(zhǎng)。USP7通過(guò)去泛素化PHF8上調(diào)cyclin A2的表達(dá)；該效應(yīng)，在體外促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖

6、，在體內(nèi)促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展。
　　6、USP7和PHF8在多種腫瘤組織中的表達(dá)上調(diào)，并與乳腺癌的惡性程度呈正相關(guān)。USP7和PHF8的蛋白及mRNA水平在乳腺中高表達(dá)，并且與乳腺癌的臨床分級(jí)呈正相關(guān)；在這些樣本中，USP7和PHF8的表達(dá)水平與cyclin A2也呈現(xiàn)正相關(guān)。
　　7、在DNA損傷反應(yīng)應(yīng)答中，USP7介導(dǎo)的 PHF8穩(wěn)定性調(diào)節(jié)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對(duì)抗DNA損傷。在DNA雙鏈損傷發(fā)生時(shí)，USP7能夠通過(guò)加強(qiáng)與

7、PHF8的相互作用和增強(qiáng)去除PHF8多聚泛素鏈，進(jìn)而增強(qiáng)同源重組修復(fù)(HR)和非同源重組末端鏈接(NHEJ)的修復(fù)效率，提高乳腺癌細(xì)胞對(duì) DNA損傷的耐受能力。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，本課題發(fā)現(xiàn)PHF8與USP7在體內(nèi)、體外有特異的相互作用。USP7能夠通過(guò)其自身的去泛素化酶活性特異性地穩(wěn)定PHF8的蛋白水平，抑制PHF8通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑發(fā)生降解。USP7介導(dǎo)的PHF8蛋白的穩(wěn)定性能激活cyclin A2信號(hào)通路，