1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文 上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文 Interleukin-10 和 MicroRNA-92a 對人巨細(xì)胞病毒 人巨細(xì)胞病毒感染 感染宿主 宿主細(xì)胞 細(xì)胞自噬和凋亡 自噬和凋亡的調(diào)控機(jī)制研究 的調(diào)控機(jī)制研究 作者姓名：王麗 作者姓名：王麗 學(xué) 號： 號：0137229215 0137229215 指導(dǎo)教師：錢繼紅 指導(dǎo)教師：錢繼紅 學(xué)科專業(yè)：兒科學(xué)（新生兒） 學(xué)科專業(yè)：兒科學(xué)（新生兒） 研究方向：新生兒巨細(xì)胞病

2、毒感染 研究方向：新生兒巨細(xì)胞病毒感染 申請學(xué)位：博士 申請學(xué)位：博士 培養(yǎng)單位：醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院 培養(yǎng)單位：醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院 答辯日期： 答辯日期：201 2016 年 4 4 月 關(guān) 鍵 詞：人巨細(xì)胞病毒 詞：人巨細(xì)胞病毒 新生兒 新生兒 凋亡 凋亡 自噬 自噬 上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文 全文摘要 文摘要 人巨細(xì)胞病毒 （human cytomegalovirus, CMV） 是宮內(nèi)感染的最常見病原體，可導(dǎo)致嚴(yán)重的

3、出生缺陷，例如顱腦發(fā)育畸形，神經(jīng)聽力損傷等，新生兒期感染，可累及多臟器，造成 CMV 相關(guān)嬰兒肝炎綜合征，CMV 相關(guān)肺炎，并可累及造血系統(tǒng)等，造成新生兒生長發(fā)育滯后，威脅新生兒健康。近年來，CMV 對宿主細(xì)胞程序性死亡（包括凋亡，自噬，應(yīng)激損傷等）調(diào)控機(jī)制，成為研究熱點。越來越多的研究表明，CMV 通過控制宿主細(xì)胞程序性死亡應(yīng)答來為自身復(fù)制提供有利條件。本研究共分為三部分，從 CMV 與宿主細(xì)胞自噬，以及非編碼 RNA調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡

4、兩方面入手， 通過建立人胚肺成纖維細(xì)胞 （MRC5） 感染 HCMV的經(jīng)典體外感染模型，探討 IL-10 對宿主細(xì)胞凋亡和病毒復(fù)制的干預(yù)作用，結(jié)果顯示： MRC5 表達(dá) IL-10 受體， 且受多種外源性刺激包括 CMV 感染和外源性 IL-10的影響。IL-10 能夠抑制 HCMV 誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞自噬，并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn) IL-10 通過抑制自噬發(fā)揮降低病毒復(fù)制的作用，IL-10 對自噬的調(diào)控是通過激活 PI3K/Akt通路。HCMV 通過

5、非編碼 RNA 途徑調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞凋亡，近年來受到廣泛關(guān)注，本文第二和第三部分以 miR-92a 為主線， 研究 CMV 相關(guān)新生兒肝損傷患兒循環(huán)miR-17~92cluster 表達(dá)及 miR-92a 調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡的機(jī)制，結(jié)果顯示：miR-17和 miR-92a 在患兒外周血表達(dá)升高，GCV 療效不良組患兒 miR-17 表達(dá)上降，且miR-92a 表達(dá)升高，對 23 例患兒 ALT 和 AST 水平與上述 miRNA 進(jìn)行 spe

6、arman等級相關(guān)分析顯示，miR-17 與 ALT 水平負(fù)相關(guān)，miR-92a 與 ALT 水平正相關(guān)。體外感染模型結(jié)果提示 HCMV 感染早期 miR-92a 表達(dá)升高，其峰值時間及維持時間與感染復(fù)數(shù)相關(guān)；通過軟件預(yù)測，mRNA 水平的 PCR 檢測，蛋白水平的Western blot 檢測和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證，確認(rèn) miR-92a 的調(diào)控靶點是BCL2L11 的 3’UTR 區(qū)， 抑制靶蛋白 Bim 表達(dá)， 從而抑制宿主細(xì)

7、胞凋亡， 而 miR-92a inhibitor（抑制劑）具有促進(jìn)凋亡抑制病毒復(fù)制的作用。全文結(jié)論：體外研究顯示外源性 IL-10 能夠抑制 HCMV 感染誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞自噬，并進(jìn)一步抑制病毒復(fù)制新生兒 HCMV 感染相關(guān)肝損傷患兒外周血 miR-17 和 miR-92a 表 達(dá)異常，且與肝功能指標(biāo)相關(guān)體外研究顯示 miR-92a 轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶蛋白 Bim 表達(dá)，并抑制宿主細(xì)胞多條凋亡途徑。miR-92a inhibitor 有提高