1、病毒的感染是人類多種疾病的起因，病毒的診斷對這些疾病的預防與治療具有重要意義。本論文圍繞熒光探針熔解曲線技術(shù)在病毒診斷中的應(yīng)用展開了研究。以熒光探針熔解曲線技術(shù)為基礎(chǔ)，我們建立了多重點突變檢測，多重靶序列識別和二維標記PCR三個中通量的致病性病毒檢測體系。本論文選擇乙型肝炎病毒(HBV)和人乳頭瘤病毒(HPV)兩種具有代表性的病毒作為研究模型建立檢測體系并進行臨床評價。
　　 第一章為緒論，首先簡要地介紹了病毒檢測技術(shù)的概況，然

2、后總結(jié)了熒光探針熔解曲線技術(shù)的主要特點以及目前適用于熔解曲線分析的熒光探針類型，最后提出本論文的設(shè)計思路和研究意義。
　　 第二章設(shè)計了一個基于熒光探針熔解曲線技術(shù)的多重點突變檢測體系。這一體系將覆蓋不同檢測區(qū)域的多色熒光探針進行組合，達到了提高檢測通量的目的。在本章節(jié)中我們根據(jù)臨床需求建立了單管三色和兩管四色兩種HBV耐藥突變檢測方案。單管三色檢測方案可以同時識別HBV最常見的4個耐藥位點上的6種耐藥突變，用于拉米夫定和阿德福

3、韋酯兩種常用核苷類似物的耐藥突變檢測。兩管四色檢測方案可以同時識別HBV的11個耐藥位點的27種耐藥突變，用于FDA認證的五種核苷類似物的耐藥突變檢測。最后我們用117HBV陽性的血清標本對單管三色HBV耐藥檢測體系進行了臨床評價。
　　 第三章提出了一種能夠同時檢測、識別并且定量多重目標序列的實時檢測技術(shù)。這一技術(shù)將實時熒光定量PCR技術(shù)和熒光探針熔解曲線技術(shù)相結(jié)合，在保持實時熒光定量PCR技術(shù)優(yōu)點的基礎(chǔ)上有效地提高了檢測通量

4、。在本章節(jié)中我們實現(xiàn)了在三個反應(yīng)管內(nèi)同時檢測、分型并定量30種常見的HPV基因型和內(nèi)標人球蛋白基因。最后我們用647份宮頸棉拭子標本對實時PCR-熔解曲線HPV檢測體系進行了臨床評價。
　　 第四章開發(fā)了一個由熒光波長和熔點溫度兩個參數(shù)對目標序列進行二維標記的中通量檢測平臺。這一平臺融合了連接酶檢測反應(yīng)，PCR擴增和熒光探針熔解曲線三個技術(shù)，大幅度地減少了識別多個目標序列所需的熒光探針數(shù)量。在本章節(jié)中我們實現(xiàn)了在只使用4條熒光探